茶叶提取物对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞保护作用

【摘要】帕金森病是一种影响患者活动能力的中枢神经系统退行性疾病,多发于中老年以上人群。至今关于帕金森病的病理研究较多、较透彻；但治疗尚无根治性的方法。茶叶提取物和茶热水浸出物无或低毒副作用,并且获取方便,尤其后者通过日常饮茶就能摄入,非帕金森病患者也能通过日常饮茶起到预防作用。本文以6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞为帕金森病(ParkinsonDisease,PD)体外细胞模型,以6种主要茶叶提取物(EGCG、咖啡碱、L-茶氨酸、茶多酚、茶黄素和茶色素)、EGCG纳米粒子以及绿茶、红茶、普洱茶茶汤为试验材料,在研究6种茶叶提取物对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用的基础上,制备了EGCG纳米粒子并探讨其与相同浓度EGCG相比对细胞的毒性和6-OHDA损伤时的保护作用。通过westernblot检测6-OHDA对SH-SY5Y细胞毒性作用机制中的相关蛋白表达量的变化,探讨PD的病因和发病机制,揭示茶叶提取物及EGCG纳米粒子对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞保护作用机制。在此基础上,进一步研究了茶汤对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用。取得结果如下：一、实验选用6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞作为PD体外细胞模型,在参考前人数据的基础上确定合适的6-OHDA处理浓度,便于后续研究的展开。浓度为100μmol/L的6-OHDA处理SH-SY5Y细胞多次重复实验结果稳定,细胞存活率为62.37±4.41%。因此选择6-OHDA浓度为100μmol/L作为对SH-SY5Y细胞的处理浓度。二、选取6种茶叶提取物及2种制备方法制备的EGCG纳米粒子(EGCG-(FA+PEG)-NPs-1、EGCG-(FA+PEG)-NPs-2)为试验材料,检测了上述8种样品对SH-SY5Y细胞的毒性作用及对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用。结果表明,在安全浓度范围内上述8种样品对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞可观察到不同程度的保护作用；EGCG、茶黄素和EGCG-(FA+PEG)-NPs-1、EGCG-(FA+PEG)-NPs-2对抑制6-OHDA造成的细胞存活率降低具有较佳的效果。同时本研究还发现,载有相同含量EGCG的纳米粒子EGCG-(FA+PEG)-NPs-1、EGCG-(FA+PEG)-NPs-2与EGCG相比具有更低的毒性和更高的保护作用效果。三、选取前期试验中对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞具较佳保护作用4种样品,通过westernblot检测细胞内凋亡相关蛋白表达量的变化。EGCG、茶黄素及EGCG的纳米粒子抑制了6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2,AKT表达的降低和Bax蛋白表达的增加。且载有相同EGCG含量的EGCG-(FA+PEG)-NPs效果优于EGCG的效果。结果显示,茶叶提取物EGCG、茶黄素及EGCG的纳米粒子对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞的保护机制与凋亡蛋白有关。四、选择绿茶、红茶、普洱茶热水浸出物作为模型药物,采用热水浸提法提取茶汤,确定各茶叶中主要热水浸出物含量,检测其对SH-SY5Y细胞的毒性及6-OHDA损伤的保护作用。结果表明,绿茶、红茶、普洱茶茶汤提取物对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞有明显保护作用,其中绿茶效果最佳。以上研究显示,茶叶提取物(EGCG、咖啡碱、L-茶氨酸、茶多酚、茶黄素和茶色素)、EGCG纳米粒子及茶热水浸出物对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞有不同程度的保护作用。其中EGCG、茶黄素及EGCG纳米粒子的细胞保护作用大致是通过抑制6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2,AKT表达降低和Bax蛋白表达增加实现的。
【作者】胡雅琼；
【导师】曾亮；
【作者基本信息】西南大学，茶学，2014，硕士
【关键词】帕金森病；茶叶提取物；EGCG纳米粒子；茶热水浸出物；westernblot；

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