热稳定性磷脂酶C生产菌的分离鉴定及酶学性质研究

【摘要】磷脂酶是一种与磷脂代谢相关的酶,能催化甘油磷脂的水解反应,水解产物是各种磷脂酸(胆碱、丝氨酸)和氨基醇(乙醇胺)。根据其水解磷脂位点的不同可以分为磷脂酶A1、A2、B1、B2、C、D,磷脂酶的商业应用前景广泛。例如PLA1、PLA2、PLC和PLD可以被广泛应用于油脂精练、磷脂改性、食品及农业杀虫剂等方面,PLC可以被应用于抗肿瘤药物,尤其在植物油脱胶等方面有广阔的应用前景,磷脂酶广泛存在于动物、植物和微生物中。微生物来源的磷脂酶种类较多,易于大规模生产,并成为工业用酶的最主要来源。本课题采用卵黄平板法从甘肃周边不同来源土壤样品中分离得到80株磷脂酶C生产菌株,经复筛得到一株磷脂酶C产量较高且该酶具有热稳定性的菌株JYSY1。并对菌株JCSYl进行了菌落形态观察(菌落大小、颜色、凸起、边缘形状)、革兰氏染色、芽孢染色、生理生化分析、16SrDNA序列同源性分析,初步鉴定菌株JYSY1是蜡样芽孢杆菌(Bacliluscereeas)。该菌株的最适生长温度及培养时间分别为25℃,24h；最佳产酶温度及培养时间分别为30℃,30h；最适生长初始pH值为7.0；最佳产酶初始pH值为7.0。本文采用(NH4)2SO4盐析、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换、SephadexG-100凝胶层析从菌株JYSY1的发酵上清液中分离纯化得到了磷脂酶C。并通过SDS-PAGE电泳法对照标准蛋白Marker测得其分子量约为48kDa,该酶的最适作用温度为50℃,最适作用的pH为8.0,当磷脂酶C在pH为8.0左右时酶活力比较稳定。Co2+和Ca2+的终浓度为0.1mmol/L时对酶促反应有促进作用,酶活力分别提高到111.59%,110.11%。Zn2+Mg2+对酶有抑制作用,当Zn2+、Mg2+终浓度达到1mmol／L时酶活力分别为58.13%,62.65%。因此Zn2+、Mg2+终浓度越大,抑制作用越明显。SDS、EDTA、EGTA均对磷脂酶C有抑制作用,PMSF对酶活力影响不大。该酶热稳定性较好,65℃保温30min后酶活力能维持在55%以上,温度超过70℃,酶活力大部分丧失,可以推断该酶是一种比较稳定的磷脂酶C,经底物特异性分析确定纯化的酶是一金属磷脂酶C。
【作者】杨艳艳；
【导师】陈吉祥；
【作者基本信息】兰州理工大学，环境工程，2014，硕士
【关键词】磷脂酶C；分离纯化；菌株筛选；菌株鉴定；生理生化；蜡样芽孢杆菌；磷脂酶纯化；酶学性质；

【参考文献】
[1]李慧.台湾高校创造力教育的实践研究[D].厦门大学,高等教育学,2014,硕士.
[2]吴波.中文文本自动分类的应用研究[D].淮北师范大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[3]李程.结直肠癌患者手术死亡风险评估系统的建立及临床应用[D].甘肃中医学院,中医外科学,2014,硕士.
[4]王琼.J公司人工成本管理研究[D].湖南师范大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[5]高夫燕,刘建忠,岑可法.褐煤与石油焦的共成浆特性及机理[J].热力发电,2014,06:92-97.
[6]刘曌宇.电针预处理通过CB1R调控神经元GluR2诱导脑缺血耐受作用的研究[D].第四军医大学,麻醉学（专业学位）,2014,硕士.
[7]戴丽娟.基于顺应理论的化妆品说明书的汉译[D].湖南科技大学,外国语言文学,2013,硕士.
[8]程高云.高速公路沿线环境演变及可视化动态模拟[D].重庆交通大学,道路与铁道工程,2012,硕士.
[9]张肖肖.月经性偏头痛患者的静息态功能磁共振研究[D].河北医科大学,神经病学（专业学位）,2014,硕士.
[10]赵飞.突发状况下供应链契约的协调机制研究[D].南京理工大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[11]菲菲.县域农村居民点用地整治研究[D].吉林大学,土地资源管理,2014,硕士.
[12]徐志远,李永军,史萍,王博婵,黄晓宇.功能化石墨烯负载冬凌草甲素抗肿瘤制剂的研究[J].有机化学,2013,03:573-580.
[13]董晓玲.熔融碳酸盐燃料电池复合基体和工作阴极制备工艺及其性能研究[D].浙江理工大学,应用化学,2013,硕士.
[14]赵元华.上市公司并购重组存在的问题及对策研究[D].西南农业大学,金融学,2004,硕士.
[15]吴巍.管内汽液两相流动模型分析[D].重庆大学,动力工程及工程热物理,2014,硕士.
[16]郭善广.苹果浓缩汁褐变、后混浊诱因及控制研究[D].陕西师范大学,食品科学,2004,硕士.
[17]张文杰.微博网络的传播模型和观点演化趋势研究[D].北京交通大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[18]李瑞丰.井冈山革命根据地行政组织建设的历史考察与现实启示[D].湖南师范大学,行政管理,2014,硕士.
[19]康晓梅.下肢偏瘫康复机器人的设计[D].长安大学,交通信息工程与控制,2014,硕士.
[20]罗庆洲.基于GML的WebGIS理论与实践探讨[D].华东师范大学,地图学与地理信息系统,2004,硕士.
[21]常城.最大熵分布估计算法及其应用[D].太原科技大学,系统工程,2013,硕士.
[22]汪琼.徐沛东民族声乐作品的艺术特征和创作特点[D].湖南师范大学,学科教学（专业学位）,2014,硕士.
[23]郝蒙.北京首都航空有限公司发展战略研究[D].首都经济贸易大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[24]高强周.城市轨道交通列车运行图设计实现与评价[D].北京交通大学,2008.
[25]徐广华.内蒙古地区银行卡产业发展战略研究[D].内蒙古大学,高级管理人员工商管理,2013,硕士.
[26]原志路.综合客运枢纽实时调度方案仿真与评估系统研究与实现[D].吉林大学,软件工程,2013,硕士.
[27]周游.镁合金化学转化膜的制备与性能研究[D].河北工业大学,应用化学,2013,硕士.
[28]焦晨.旋流净化与强紫外+超声混流压载水系统研究[D].江苏科技大学,轮机工程,2014,硕士.
[29]柏丽.中国6个双峰驼群体微卫星遗传多样性分析[D].宁夏大学,养殖（专业学位）,2014,硕士.
[30]雷明芳.南宁市少数民族流动人口管理和服务研究[D].广西民族大学,马克思主义民族理论与政策,2013,硕士.
[31]姚建标.银杏酸单体分离、分析及应用[D].浙江大学,药学,2013,硕士.
[32]胡月.BP算法并行化及在数据挖掘中的应用研究[D].重庆大学,2003.
[33]马田田.甘蓝型油菜抗菌核病QTL定位及相关基因表达分析[D].南京农业大学,作物遗传育种,2012,硕士.
[34]李国威.胃癌中医证型与P53、VEGF表达水平相关性研究[D].陕西中医学院,中西医结合临床（专业学位）,2013,硕士.
[35]侯佳旭.甘南藏族自治州碌曲县财政转移支付研究[D].西北师范大学,公共管理,2013,硕士.
[36]王涵.福建省高中生心理健康状况研究[D].福建师范大学,教育,2003,硕士.
[37]王艳茹.内蒙古生产建设兵团组建背景及撤销原因研究[D].内蒙古师范大学,中国近现代史,2013,硕士.
[38]蔡坚.新疆维吾尔族、汉族缺血性脑卒中相关危险因素及与WNK1基因多态性的关联研究[D].新疆医科大学,内科学,2013,博士.
[39]刘明星.供电企业营销效果指标评价[D].华北电力大学（北京）,技术经济及管理,2003,硕士.
[40]莫怡丰.湛江地区慢性HBV感染者中医体质分布规律研究[D].广州中医药大学,中医内科学（专业学位）,2013,硕士.
[41]于峰.凌海市乡镇初级中学化学教育现状及分析[D].内蒙古师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[42]陈维仁.胸腔积液200例病因及诊断方法分析[D].大连医科大学,呼吸内科学,2012,硕士.
[43]田力.抗战时期钱穆民族复兴思想研究[D].湖南师范大学,中国近现代史,2013,硕士.
[44]聂开放.3G移动手机耗电性能测试用例的开发[D].中国地质大学（北京）,电子与通信工程,2014,硕士.
[45]刘慧.知识工作团队异质性、交互记忆系统与团队绩效关系的实证研究[D].沈阳师范大学,企业管理,2014,硕士.
[46]本报记者郑意凡张珺.创意盛宴改变你我生活[N].泉州晚报,2013-06-20001.
[47]刘晓敏.产业链视角下FDI对山西煤炭产业升级的影响[D].山西师范大学,国民经济学,2014,硕士.
[48]赖茂生,梁南燕.信息技术与零售之王沃尔玛[J].情报科学,2003,09:966-969.
[49]陈亮.基于语音信号的嵌入式假肢控制系统研究[D].长安大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[50]刘建军.新中国留学政策及其科技影响力分析[D].山西大学,科学技术哲学,2004,硕士.