热稳定性脂肪酶生产菌的筛选、性质及其应用研究

【摘要】脂肪酶是一种特殊的甘油三酯水解酶,使甘油三酯水解为甘油二酯、单甘油酯、甘油和脂肪酸,脂肪酶具有催化酯交换、酯合成、酰基转移等反应的特性,所以在医药、日化、油脂加工、食品等工业领域广泛应用。20世纪90年代,许多学者开始研究用生物酶法制备生物柴油,开发出了多种用脂肪酶代替化学催化剂的转化过程。本论文采用平板透明圈法从不同地区农田、油脂污染及石油污染土壤样品中筛选出具有产脂肪酶能力的菌株87株,其中高效脂肪酶生产菌19株。经复筛得到一株脂肪酶产量较高的菌株Mhy-1。菌株Mhy-1菌落呈圆形,表面光滑且不透明,纵剖面低凸起,边缘整齐,颜色为淡黄色,革兰氏染色阴性,不产芽孢。根据形态特征、生理生化分析及16SrDNA序列同源性分析,初步鉴定菌株Mhy-1为杀鲑气单胞菌(Aeromonassalmonicida)。对Mhy-1进行生长特性研究及产酶条件优化,确定该菌在前10h生长迅速,10h后进入稳定期,菌株最佳产酶时间为36h,最适生长温度及初始pH分别为35℃和pH6.0-9.0,最适产酶温度及初始pH值分别为30℃和pH9.0,初步确定该酶为碱性脂肪酶。采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharosefastflow阴离子交换层析从菌株Mhy-1的发酵上清液中分离纯化了脂肪酶,对纯化后的脂肪酶进行酶学性质研究。酶的分子量约为34kDa,最适作用温度为45℃,最适作用pH8.0。该酶在pH7.0-9.0和温度30℃-70℃的范围内稳定,在70℃30min处理后能维持80%以上酶活力,是一热稳定酶,Ca2+对酶促反应有促进作用,Zn2+、Mg2+、CO2+对酶有一定的抑制作用。SDS、EDTA、EGTA均对酶有一定的抑制作用,而PMSF的加入对酶的活力没有明显影响。以硅藻土为载体,对纯化后的酶进行固定化处理,固定化的脂肪酶用于生物柴油的催化合成,转酯率为21.48%。
【作者】王颖；
【导师】陈吉祥；
【作者基本信息】兰州理工大学，环境工程，2014，硕士
【关键词】脂肪酶；筛选；纯化；酶学性质；生物柴油；

【参考文献】
[1]朱善斌.脱氮复合生物载体的制备及其在低C/N比污水脱氮处理中的应用研究[D].北京交通大学,2014.
[2]周儒省.关于小波展开的若干问题[D].湖南师范大学,基础数学,2014,硕士.
[3]王小东.一维下料及二维数据集匹配优化的研究[D].大连理工大学,机械设计及理论,2004,硕士.
[4]齐晓妍.Gd~(3+)/Yb~(3+)掺杂ZnO量子点双模式MRI/CT成像探针[D].长春工业大学,有机化学,2013,硕士.
[5]程傲.珠三角地区多机场放行时隙分配策略研究[D].南京航空航天大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[6]蒋艳荣.广西都安编织工艺品开拓东南亚市场策略分析[J].南宁职业技术学院学报,2014,03:33-35.
[7]韩铁权.空压机的喘振及其防止[J].冶金自动化,1981,01:20-26.
[8]辛亚梅.俄罗斯远东地区渔业的现状、问题和前景[D].黑龙江大学,俄语语言文学,2013,硕士.
[9]张珂.我国银行保险经营模式研究[D].湖南科技大学,工商管理,2013,硕士.
[10]蔡勇,方辉,金涛,周艳,刘华.湖底热泉声学测温控制系统的研究[J].机电工程,2014,02:154-158.
[11]张智.培菲康对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病大鼠肠黏膜屏障的作用[D].广西医科大学,儿科学（专业学位）,2013,硕士.
[12]代玉银.飞秒激光在空气中的传输研究[D].吉林大学,原子与分子物理,2014,硕士.
[13]钟明,陈献桃,黄宏新.基于Web的Internet化学资源挖掘[J].锦州师范学院学报(自然科学版),2002,04:17-20.
[14]翟海峰,苏宏业,董利达,王肖,褚健.一类分段线性混杂系统的最优控制策略研究[J].控制与决策,2002,06:863-866+875.
[15]彭志生.供港澳食用动物检验检疫管理模式研究[D].中国农业大学,预防兽医,2004,硕士.
[16]吴姗.肌切蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及其在顺铂耐药性中作用的研究[D].南京医科大学,妇产科学,2013,硕士.
[17]程思.紫外/过硫酸盐体系中溴酸盐生成规律的研究[D].哈尔滨工业大学,市政工程,2014,硕士.
[18]张世勋.再制造生态供应链建模及仿真研究[D].郑州大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[19]童勤业,陈琢,李光.系统参数估计的混沌方法[J].控制与决策,2003,04:427-431.
[20]姜代红.数据仓库技术在系统集成中的应用研究[J].徐州工程学院学报,2005,05:59-61.
[21]高嵩.内蒙古大兴安岭比利亚谷铅锌矿床地质特征与成因研究[D].吉林大学,矿物学、岩石学、矿床学,2014,硕士.
[22]丁小丽.无限维线性系统的混沌性质[D].苏州大学,基础数学,2013,硕士.
[23]颜海华.宝钢电机变压器试验系统的设计与实现[D].大连理工大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[24]吕书亮.健全独立审计制度完善上市公司会计信息质量[D].东北财经大学,会计学,2003,硕士.
[25]苟长飞.盾构隧道壁后注浆浆液扩散机理研究[D].长安大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[26]何方.经验似然方法及其在中国石油价格趋势预测中的应用研究[D].湖南师范大学,统计学,2014,硕士.
[27]王志平.基本遗传算法在围海工程规划中的建模与应用研究[D].河海大学,港口海岸及近海工程,2004,硕士.
[28]许国标.中日韩汽车产业贸易竞争与中国汽车产业对策研究[D].吉林财经大学,区域经济学,2014,硕士.
[29]张岁岁.《生活大爆炸》幽默话轮转换研究[D].重庆大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[30]曹威.河北省公共就业服务体系研究[D].天津大学,公共管理,2013,硕士.
[31]王鹤静.高校图书馆校园文化建设研究[D].吉林大学,图书情报,2013,硕士.
[32]魏道兴.厚膜混合集成电路生产技术的进展[J].电子元件与材料.1986(01)
[33]王计敏.蓄热式铝熔炼炉熔炼过程多场耦合的数值模拟及优化研究[D].中南大学,2012.
[34]赵珺.天津滨海新区廉租房融资模式运用的对策研究[D].湖北大学,土地资源管理,2011,硕士.
[35]刘旭.绿色矿山建设的社区和谐评价指标体系研究[D].中国地质大学（北京）,海洋地质,2013,硕士.
[36]张晓晨.复合驱采出液破乳剂评价技术研究[D].吉林大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[37]申耀锋.和谐社会视野下中国利益分化现象研究[D].河北师范大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[38]王英娜.卡托普利对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶-2表达的影响[D].大连医科大学,神经病学,2012,硕士.
[39]孙轶轩,邵春福,计寻,朱亮.基于ARIMA与信息粒化SVR组合模型的交通事故时序预测[J].清华大学学报(自然科学版),2014,03:348-353+359.
[40]卢青青.和平发展与和谐世界外交战略理念研究[D].南京师范大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2012,硕士.
[41]卢岚.信息时代的工业工程[J].国际学术动态,2003,01:41+45.
[42]李露露.地震作用下钢筋混凝土连续梁桥的易损性分析[D].北京交通大学,2014.
[43]张慧.基于数值模拟的窄高型尾水管内部流动分析[D].河北工程大学,水利水电工程,2012,硕士.
[44]黄亚军.DZ型运动监控系统[J].机电一体化.1996(05)
[45]记者吴晋娜.国内首片15英寸单层石墨烯透明电极制备成功[N].科技日报,2013-01-28006.
[46]张坤.山东省新型农村合作医疗运行绩效评价研究[D].山东财经大学,社会保障,2012,硕士.
[47]李哲,季学军,仇新宏.双周期可调节的变极性方波电压注入式转子接地保护[J].电力系统自动化,2012,16:98-101.
[48]夏秋.基于收益管理的海运集装箱班轮舱位分配研究[D].大连海事大学,物流工程与管理,2013,硕士.
[49]谭财胜.考虑铰间间隙的3-RPR平面并联机构动力学特性研究[D].哈尔滨工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[50]邹振玉.蟾皮抗肿瘤活性组分筛选及荷人结肠癌裸鼠淋巴道化疗的实验研究[D].中国人民解放军医学院,外科学,2013,硕士.