钝裂银莲花查尔酮合成酶基因核心片段的扩增及分析

【摘要】钝裂银莲花(Anemoneobtusiloba)是毛茛科(Ranunculaceae)毛莨亚科银莲花属(AnemoneL.)的一种多年生草本植物,其花色有黄色、浅黄色和白色三种。目前对钝裂银莲花的研究主要集中在其药用价值、性分配、繁殖分配、繁殖特征及资源分配、花部特征等方面,分子层面只有不同环境条件下钝裂银莲花的ISSR遗传多样性分析的报道。本研究结合具体的研究条件,采用从钝裂银莲花花瓣中提取总RNA,反转录后进行RT-PCR的方法克隆钝裂银莲花花色合成中的第一个关键酶查尔酮合成酶的核心片段,研究结果如下：1.本实验构建了一种不用进行RNA电泳即可验证提取的RNA是否可以用于后续实验的方法：设计一种骨架蛋白或组成蛋白的基因扩增的引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到的基因片段进行测序,如果该序列为所设计基因的片段,则证明引物设计正确,然后再用该引物对所提取总RNA的反转录产物进行扩增,如果同样可以得到该基因的序列,则证明提取到的总RNA及其反转录产物纯度较高,可用于RT-PCR反应；2.本实验通过设计肌动蛋白Actin基因的引物,以叶片基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到了Actin基因的序列片段,然后用该引物以花瓣提取的总RNA的反转录产物为模板进行PCR,仍然得到了Actin的基因片段,并证明以DNA为模板的扩增产物含有一段内含子基因序列；3.以设计的路线为基础,根据GenBank中登录的查尔酮合成酶(CHS)基因的序列,设计简并引物,并对提取的钝裂银莲花花瓣总RNA进行RT-PCR,得到3个钝裂银莲花CHS的基因片段,经分析,380碱基的片段的3’端与另两个583碱基的片段的5’端有77碱基的重合序列,推测可能为同一序列的两段,经整合后与其他植物CHS序列进行比对发现证实为同一序列的两部分。得到的两个序列编码的氨基酸序列相同。
【作者】刘凤梅；
【导师】刘左军；
【作者基本信息】兰州理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】钝裂银莲花；肌动蛋白基因；查尔酮合成酶；克隆；序列分析；

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