中断大鼠骨髓间充质干细胞的正常诱导分化后的细胞恶变研究

【摘要】肿瘤干细胞与干细胞的相似特性提示肿瘤干细胞可能来源于异常的干细胞,这种异常可能发生在干细胞的正常分化过程中,即“成熟阻滞假说”。以此为基础,本研究选用大鼠骨髓间充质干细胞BMSCs为研究对象,建立BMSCs向神经细胞、脂肪细胞和成骨细胞的分化模型,在各组诱导分化的不同时间点撤去诱导剂后正常培养。之后对各组细胞进行细胞的分化特性分析和细胞的恶性转变分析研究。具体方法如下：1.采用全骨髓贴壁筛选法分离大鼠BMSCs进行体外培养与扩增。2.采用β-巯基乙醇诱导BMSCs向神经细胞分化,并分别在8h、24h、40h、56h和72h撤去诱导剂；采用胰岛素、吲哚美辛和地塞米松联合诱导BMSCs向脂肪细胞分化,并分别在1d、3d、5d、7d和9d撤去诱导剂；采用地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠同时诱导BMSCs向成骨细胞分化,并分别在1d、3.5d、6d、8d和10.5d撤去诱导剂。观察细胞的形态和分化特性。3.采用软琼脂集落形成实验分离具有克隆形成能力的各组中断诱导的细胞,并对其进行细胞病理学HE染色鉴定和CTX免疫抑制小鼠成瘤实验。对接种中断诱导的细胞的组织石蜡包埋切片后进行组织病理学HE染色和抗体免疫组化染色分析。研究结果如下：1、分离大鼠BMSCs,并在体外增殖培养。2、成功诱导大鼠BMSCs向神经细胞、脂肪细胞和成骨细胞的分化,也得到了表达一定分化特性的各组中断分化细胞。3、各组中断分化细胞在软琼脂集落形成实验中表现出一定的克隆形成能力,其中,中断神经诱导40h组、中断脂肪诱导3d组、中断成骨诱导3.5d组的细胞表现出较强的克隆形成能力,细胞发生病理性恶变,获得致瘤性。综上所述,中断BMSCs的正常分化的培养的细胞不仅具有一定的分化特性,也有转为恶性细胞的趋势,细胞可能为肿瘤干细胞。
【作者】黄小娟；
【导师】王鸣刚；廖世奇；
【作者基本信息】兰州理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】骨髓间充质干细胞；中断诱导细胞；分化特性分析；恶性程度分析；肿瘤干细胞；

【参考文献】
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