紫薯、麻黄内生真菌及发酵产物活性研究

【摘要】植物内生真菌是一个庞大的微生物系统,其发酵产物能产生多种与宿主植物相同或相似的活性成分,已成为人们寻找新型药物的重要来源。本课题以紫薯和麻黄为研究对象,分离出内生真菌,对其发酵产物进行抗肿瘤、抑菌、抗氧化活性研究,筛选出高活性菌株。采用组织块分离法,以PDA为分离培养基,分别从紫薯和麻黄中分离得到14株和59株内生真菌。通过菌落形态观察和显微鉴定,对照《真菌鉴定手册》对10株产孢的紫薯内生真菌和20株产孢的麻黄内生真菌进行鉴定。紫薯内生真菌鉴定结果：赤霉属(Gibberella)8株、链格孢属(Alternaria)1株、聚孢霉属(Glomerularia)1株；麻黄内生真菌鉴定结果：链格孢属(Alternaria)7株、青霉属(Penicillium)6株、聚孢霉属(Glomerularia)4株、头孢霉属(Cephalosporium)1株、单梗头孢霉属(Corethropsis)1株、鞭孢霉属(Mastigosporium)1株。对紫薯和麻黄中分离得到的内生真菌进行发酵,发酵液依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取,菌丝体用甲醇提取,紫薯得42个样品、麻黄得177个样品。用MTT法,以人肺腺癌细胞株A549和人肝癌细胞株SMMC-7721为受试瘤株,对紫薯内生真菌的发酵产物进行抗肿瘤活性研究,结果显示,对A549细胞株抑制率大于50%的有10个样品,其中抑制率最高的为ZS102的菌体部位,抑制率为66.56%。对SMMC-7721细胞株的抑制率相对较弱,抑制率最高的为ZS301的菌体部位,其抑制率为46.64%。以G+性菌(金黄色葡萄球菌、地衣芽孢杆菌、乳链球菌)、G-性菌(大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌)为6种指示菌,用滤纸片法对紫薯和麻黄内生真菌发酵产物进行抑菌活性研究,用二倍稀释法对活性较好的样品进行最小抑菌浓度测定。结果表明,紫薯的42个样品中,有17个样品对6种指示菌都有抑制作用,占总测试样品的40%；麻黄的177个样品中,有53个样品对6种指示菌都有抑菌活性,占29.9%。对紫薯和麻黄内生真菌发酵产物抗氧化活性研究,测定指标为总还原能力、对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除作用和对羟自由基的清除作用。紫薯内生真菌抗氧化结果显示：41个样品表现出不同程度的总还原力；26个样品表现出DPPH自由基清除活性,占61.9%；40个样品表现出羟自由基清除活性。麻黄内生真菌抗氧化结果表明：152个样品表现出一定的总还原能力,占样品总数的85.8%；107个样品对DPPH有清除活性,占60.4%；99个样品有羟自由基清除活性,占55.9%。运用薄层层析、柱层析、重结晶等方法对菌株ZS301的乙酸乙酯部位进行分离,得到1个化合物,经鉴定,为sapinofuranoneB。对抗肿瘤、抑菌、抗氧化活性相对较好的20(紫薯9株,麻黄11株)株内生真菌进行分子生物学鉴定。结果表明,紫薯9株内生真菌中,7株为赤霉菌属(Gibberella),1株为间座壳属(Diaporthe),1株为非培养子囊菌的同源菌。麻黄11株内生真菌中,7株为镰孢菌属(Fusarium),1株为枝孢菌属(Cladosporium),1株为青霉属(Penicillium),1株为毕赤酵母属(Pichia),1株为链格孢属(Alternaria)。
【作者】李伟娟；
【导师】杨林；文卫东；
【作者基本信息】兰州理工大学，制药工程，2014，硕士
【关键词】内生真菌；抗肿瘤活性；抑菌活性；抗氧化活性；化学成分分离；

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