夹脊电针干预脊髓损伤大鼠OL分化和髓鞘再生的研究

【摘要】目的：通过观察夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠损伤段脊髓中少突胶质细胞(Oligodendrocyte,OL)转录基因-2(olig2)、sox10和髓鞘重要结构蛋白-髓磷脂碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)的表达、髓鞘的形态学变化及大鼠运动功能恢复的作用,并以单唾液酸神经节苷脂(GM1)作对照,探讨夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠OLs分化过程的干预及促进大鼠髓鞘再生和运动功能恢复的可能机制。方法：选用健康雄性SpragueDawley(SD)大鼠144只,随机分为假手术组、模型组、单唾液酸神经节苷脂治疗组(GMl组)、夹脊电针治疗组(EA组),每组再随机分为1d、7d、14d三个时间段组(n=12)。除假手术组只切除椎板外,其他各组用NYU脊椎冲击损伤仪致大鼠T9-T10段脊髓急性中度损伤。模型组不予治疗。药物组予GM1腹腔注射,10mg/kg,每日一次。电针组在损伤节段周围取夹脊穴电针治疗,疏密波,频率2/100Hz,电流1mA,每次20min,每日一次。各时间点治疗结束后进行以下实验操作：①各时间点大鼠处死前进行BBB(Basso,Beattie,Bresnahan)评分以观察大鼠后肢运动功能恢复情况；②应用LuxolFastBlue(LFB)法进行髓鞘染色,并应用图像分析软件观察受损段脊髓白质区平均积分光密度(IntegratedOpticalDensity,IOD)值,观察髓鞘的再生情况；③应用WesternBlot方法检测OL转录因子olig2、sox10以及髓鞘结构蛋白MBP的表达,观察夹脊电针对OLs的分化及再髓鞘化作用。结果：①术后1天两干预组与模型组BBB评分无明显差异,7天和14天时两干预组大鼠BBB评分逐渐增高,与模型组比具有显著性差异(P<0.01),EA组与GMl组比在两时间点均有显著性差异(P<0.01)；②LFB髓鞘染色发现脊髓损伤后白质区域有较大面积的染色变浅,间隙变稀疏、排列不均匀,且有大量空泡存在,1天模型组IOD值较假手术组明显降低(P<0.01),两干预组较模型组无明显差异,两干预组间无明显差异,7天和14天两干预组髓鞘含量逐渐增多,IOD值逐渐增大,与模型组比较均具有显著性差异(P<0.05或P<0.01),夹脊电针组与药物组比在两时间点均有显著性差异(P<0.05)；③术后各组olig2、sox10的表达较假手术组增多,模型组与假手术组比在各时间点均有显著性差异(P<0.01),两干预组7天达峰值,14天略有下降,与模型组比在各时间点均具有显著性差异(P<0.01或P<0.05),两干预组间在各时间点具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)；术后各组MBP的表达增多,模型组与假手术组比在各时间点均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),两干预组蛋白表达逐渐增多,14天达高峰,与模型组比在各时间点均具有显著性差异(P<0.01),两干预组间在术后1天时无显著性差异,7天、14天时均具有显著性差异(P<0.01)。结论：①夹脊电针能够促进急性脊髓损伤大鼠运动功能的恢复；②夹脊电针能够促进急性脊髓损伤大鼠损伤局部髓鞘再生；③夹脊电针可能通过对OLs的转录调控因子的干预,从而促进OLs分化,发挥髓鞘再生和大鼠运动功能恢复的作用；④夹脊电针与GM1可能具有相同的作用靶点。
【作者】孙连珠；
【导师】马睿杰；
【作者基本信息】浙江中医药大学，针灸推拿学，2014，硕士
【关键词】脊髓损伤；夹脊电针；少突胶质细胞；分化；转录因子；髓磷脂碱性蛋白；髓鞘再生；

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