柑橘褐斑病菌的生物学特性及遗传多态性研究

【摘要】柑橘褐斑病(Citrusbrownspot)于1903年在澳大利亚的皇帝柑(EmperorMandarin)上首次发现。随后,美国、以色列、南非、土耳其、西班牙、巴西、阿根廷、希腊和伊朗等国相继报道。近年,柑橘褐斑病在我国陆续发生,危害逐年加重,已引起各地各部门的关注。在2003年云南当地品种塘坊橘上观察到该病害,于2010年我国首次正式报道。自2007年起,广西广东等地贡柑、椪柑上就已见明显褐斑病症状,当地诊断为“急性炭疽病害”,对病原菌的鉴定也没有明确。2011年重庆万州红橘的病害被确认为褐斑病,病原菌鉴定为链格孢菌(Alternariaalternata),为后续的鉴定[作提供了理论依据。为进一步明确我国褐斑病发生情况及其病原遗传多态性,随后我们采集了重庆万州、北碚,广东,广西,浙江,西班牙典型病叶和病果并进行了分离鉴定,得到50株典型链格孢小孢子种菌株,通过致病性测定,形态学和分子鉴定确定为褐斑病病原菌。在鉴定工作中,我们首次在杂柑品种上发现褐斑病菌,并且其发病症状同广东,广西,重庆万州病害症状类似。本研究主要获得以下结果：1.通过田间症状观察、典型样品分离培养和致病性测定,结合形态学和分子生物学方法,首次在国内柑橘杂柑品种上鉴定到柑橘褐斑病菌,并与国内外相关报道对比,认为天草和费尔切尔德杂柑上发生的病害为柑橘褐斑病,根据寄主特异性判断该病原菌应属于橘致病型。广东、广西发病叶片也可分离到链格孢菌株,并完成柯赫氏证病实验,确定为柑橘褐斑病。2.后续实验中我们选取典型菌株ZTGYL-3(重庆万州,红橘)和SP-36(西班牙,克里曼丁)进行了生物学特性研究,测定了影响其菌丝生长的培养因子。结果表明：在PDA等7种培养基上两个菌株均可生长,在PDA、CAA、PCA三种培养基上长势较好；温度对供试菌株菌丝生长有明显影响,差异显著,在5℃-35℃范围内均能生长,最适温度均为28℃,SP-36和ZTGYL-3菌株产孢最适温度分别为20℃、25℃；供试菌株在pH4-11范围内均能生长,在pH5-9范围内长势良好,差异不显著,当pH>11时菌丝不能生长,SP-36和ZTGYL-3菌株产孢最适pH值分别为pH7和pH6。在营养利用方面,在Czapek培养基基础上,用不同碳源和氮源代替,其中供试菌株对可溶性淀粉和蛋白胨利用效果最好,在氯化铵和硫酸铵为氮源的培养基上长势最弱,抑制菌丝和孢子产生。生物学特性研究发现,在不同培养条件下,西班牙菌株生长速率、产孢量均优于重庆菌株,结合世界柑橘褐斑病发病区域、发生时间和致病性测定比较,推测世界发病较早地区致病菌对逆境的适应性也较强。3.选取30株分离致病菌株,根据Peever等人对柑橘相关链格孢小孢子种研究报道,选取EPG,OPA2-1、OPA1-3、OPA10-2等四个基因位点进行遗传多样性研究测定,并对部分菌株的生长速率和菌落形态进行观察记录。测定结果将四个位点结合构建遗传进化树,总体菌群遗传变异与地理来源、寄主品种缺乏相关性,但是,重庆万州桠柑和浙江永嘉瓯柑菌株分支与生长速率有一定相关性,采自广西枝条两菌株在生长速率和遗传关系方面都呈现较大差异。
【作者】赵圆；
【导师】唐科志；
【作者基本信息】西南大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】柑橘褐斑病；链格孢；鉴定；生物学特性；遗传多样性；

【参考文献】
[1]马文明.“我们”散文诗群的艺术观念及创作实践[D].西南大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[2]于涛.刹那间人性的狂欢[D].西南政法大学,国外马克思主义理论,2012,硕士.
[3]邵旭.超新星宿主星系的星族分析[D].河北师范大学,天体物理,2012,硕士.
[4]李廷廷.基于进化型神经网络的供应商评估选择[D].大连理工大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[5]湖南大学教授文双春.替物理学授了诺贝尔化学奖?[N].中国教育报,2011-10-17005.
[6]张敏超.基于半监督多标签学习的文献自动链接方法研究与实现[D].西北大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[7]徐文军,杨洪明,赵俊华,董朝阳,赖明勇,薛禹胜.冰风暴灾害下电力断线倒塔的概率计算[J].电力系统自动化,2011,01:13-17.
[8]张红.腐蹄病奶牛血浆差异蛋白的筛选及炎性标记物BoHp的表达与抗体制备[D].黑龙江八一农垦大学,基础兽医学,2014,硕士.
[9]邢国红.适合小学语文第二学段合作学习的内容研究[D].东北师范大学,教育,2012,硕士.
[10]常康,薛峰,杨卫东.中国智能电网基本特征及其技术进展评述[J].电力系统自动化,2009,17:10-15.
[11]李东旭.面向拆卸的液晶显示器结构设计方法及可靠性研究[D].合肥工业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[12]柏伟荣.苯胺对紫萍营养生长、光合色素及抗氧化酶系统的影响[D].扬州大学,水生生物学,2012,硕士.
[13]李玥.民事反诉制度研究[D].黑龙江大学,诉讼法学,2013,硕士.
[14]张焕玉.典型岩溶区县森林景观格局动态研究[D].西南大学,自然地理学,2014,硕士.
[15]王平.书面语篇构建中的语境顺应分析[D].武汉科技大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[16]向科炜,郑静,郭丽丽,黄光速,李光宪.石墨烯/碳纳米管杂化填充的乳液聚合丁苯橡胶热降解动力学研究[A].中国化学会高分子学科委员会.2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——主题C：高分子结构与性能[C].中国化学会高分子学科委员会:,2013:1.
[17]刘来兵.论现代化范式的教育史学实践[J].教育研究与实验,2014,02:31-35.
[18]许旺.IC互连碳纳米管关键技术研究[D].天津理工大学,2010.
[19]吉乃提汗·马木提,谭敦炎.被子植物雌全同株性系统:系统演化、性表达与进化意义[J].植物生态学报,2014,01:76-90.
[20]柏金辰.硬棘软珊瑚的化学成分及生物活性研究[D].吉林大学,药物化学,2013,硕士.
[21]杨亮.GPS技术在边坡监测中的应用研究[D].兰州理工大学,防灾减灾及防护工程,2014,硕士.
[22]吕兰.石油钻井用新型五缸泥浆泵的研发及应用[D].西南交通大学,机械工程,2014,硕士.
[23]董伟.建筑电气节能研究[D].长安大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[24]于澜.RFID技术对供应链绩效影响的研究[D].北京邮电大学,供应链管理（专业学位）,2013,硕士.
[25]郝晶晶,朱建军.群体分类偏好下的双重语言信息融合聚类方法[J].控制与决策.
[26]崔琦.异面交会的轨道设计与制导方法研究[D].哈尔滨工业大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[27]骆菲.农民工政治参与现状及其制约因素研究[D].贵州民族大学,社会学,2013,硕士.
[28]韩琪.煤炭战略新兴产业链演化机理研究[D].中国矿业大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[29]聂子健.李嵩《骷髅幻戏图》合理性与荒诞性研究[D].西安美术学院,美术,2014,硕士.
[30]张霖,吴麒,王海涛,张平.单变量控制系统的智能设计[J].控制与决策,1996,05:589-591+595.
[31]汪红卫.PI3K/AKT相关信号通路在猪牙皂提取物抑制人肝癌细胞SMMC-7721中的表达[D].湖北中医药大学,中医内科学,2014,博士.
[32]孙晓磊.基于设备诊断报告的诊断专家决策支持方法[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[33]陈小文.A公司成品油直销市场策略研究[D].广东工业大学,工商管理,2013,硕士.
[34]游勇.基于视频动态特征分析的烟雾检测算法研究[D].西南交通大学,交通信息工程及控制,2013,硕士.
[35]刘沙沙.股东退股权制度研究[D].大连海事大学,法律,2013,硕士.
[36]闫奇.特厚连铸矩形坯结晶器长度的研究[D].燕山大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[37]赵连海.惯组本体在高速铣机床上数控加工技术研究[D].国防科学技术大学,航天工程,2012,硕士.
[38]刘佳.电视银行后台管理子系统的设计与实现[D].北京交通大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[39]苑显悦.我国公共租赁房建设问题与对策研究[D].山东财经大学,社会保障,2013,硕士.
[40]孙宁.苹果砧木耐盐突变体的筛选及其RAPD分析[D].河北农业大学,果树学,2004,硕士.
[41]关楠楠.基于微量试剂分配控制的微操作方法和实验研究[D].哈尔滨工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[42]王冀军.接触共振频率与摩擦噪声频率相关关系的试验研究[D].西南交通大学,机械工程,2013,硕士.
[43]张双.被征地农民就业方式研究[D].湖南师范大学,社会学,2014,硕士.
[44]薛海鹏.基于WEB富客户端体验交互技术的研究与改进方案的实现[D].北京交通大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[45]李媛.关中传统民居砖石雕刻艺术与内涵研究[D].西安建筑科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[46]周升娟.基于新课程标准下的乡土地理教材建设[D].山东师范大学,学科教学,2012,硕士.
[47]曾光明.商标的表现手法刍议[J].包装世界.1999(06)
[48]杨昕映,王立娟.救援列车驻地工艺设计[J].铁道标准设计,2014,10:117-121.
[49]权妍丽.功能化多壁碳纳米管电极的构筑及其电化学传感研究[D].西北师范大学,2012.
[50]魏炜.消费品供应链风险管理研究[D].北京交通大学,2011.