构建RNA结合蛋白表达文库并研究其在信号转导中的调控机制

【摘要】转化生长因子-β(TransformingGrowthFactor-β或者TGF-β)作为一种重要的细胞因子在细胞的生长、增殖、分化中发挥着非常重要的调控作用。因此,TGF-β信号通路的调控异常与人类多种疾病密切相关如癌症等。在TGF-β信号传递过程中Smads蛋白发挥了重要的作用。Smads家族蛋白根据其结构和功能可以分为三大类,分别是受体激活的R-Smads(如Smad2/3),通用转导的Co-Smad,以及抑制型的I-Smads,在经典的TGF-β信号通路中,配体与细胞表面的受体结合,从而引起R-Smads的磷酸化。磷酸化的R-Smads与Co-Smad结合形成三聚体进入细胞核,结合到特定的DNA序列从而调控下游基因的表达。在TGF-β信号通路中,转录水平的研究已经比较清楚,但是转录后水平的调控机制还不是非常清晰。基因在转录后,需要经过剪接加工成为成熟的mRNA,最后翻译成为蛋白质。经典的转录后剪接加工调控主要是通过RNA结合蛋白识别mRNA上的增强或抑制单元来实现的。在TGF-β信号通路中,RNA结合蛋白如何参与其转录后调控的机制还不清晰。本研究拟以构建RNA结合蛋白文库为载体,结合细胞水平和分子水平的实验,研究RNA结合蛋白在TGF-β信号通路中的调控作用。根据RNA结合蛋白数据库中的信息,在人类细胞中有235个蛋白含有一个或多个RNA结合单元(RNARecognitionMotif或者RRM)。对照cDNA文库(HumanORFeome5.1),我们获得了112个RNA结合蛋白的cDNA。通过Gateway系统,我们将文库中的cDNA成功构建到慢病毒载体上,并在293T细胞中进行了表达检测,其中86个可以正确表达蛋白。然后我们利用TGF-β荧光素酶报告系统SBE-luc在HaCaT细胞中进行初步筛选并发现调控TGF-β多个重要蛋白。我们围绕其中一个蛋白RBP75进行了深入研究,实验证实RBP75可以促进TGF-β信号通路,从而促进细胞发生上皮细胞-间充质细胞转化(EpithelialMesenchymalTransition或EMT)。进一步研究证实,RBP75的RNA结合单元能够直接与蛋白Smad2/3相互作用,从而促进TGF-β信号通路的转导。这为研究RNA结合蛋白在癌症细胞转移中的调控机制提供了新的参考依据。
【作者】陈敏霞；
【导师】肖睦；
【作者基本信息】浙江大学，细胞生物学，2014，硕士
【关键词】RNA结合蛋白；TGF-β信号通路；EMT；

【参考文献】
[1]贺友龙.高超声速目标等离子体流场电磁特性数值模拟[D].南京理工大学,电磁场与微波技术,2013,硕士.
[2]尚成园.思想政治教育在高校突发事件应急管理中作用研究[D].河北科技大学,思想政治教育,2014,硕士.
[3]赵章风,姚世泽,张宪,钟江,沈斌.扁钢精轧过程的数值模拟与分析研究[J].机电工程,2014,03:277-282.
[4]张旭.我国企业财务文化研究[D].山西财经大学,会计学,2014,硕士.
[5]沈飞.乌司他丁联合姜黄素抑制结直肠癌肝转移的实验研究[D].广州医科大学,普通外科学,2014,硕士.
[6]陈欣瑶.“李双双”始末[D].北京大学,现当代文学,2013,硕士.
[7]夏熹.核电工程中进度接口管理的研究[D].天津大学,工程管理,2013,硕士.
[8]庄绪强.WLAN攻击技术研究[D].西安电子科技大学,计算机系统结构,2011,硕士.
[9]周帅.支持动态调整的组合服务执行引擎的研究与实现[D].东北大学,计算机应用技术,2010,硕士.
[10]张新军,虞周均.斜拉-悬吊协作体系桥地震反应分析[J].桥梁建设,2014,06:88-93.
[11]杨艾平.基于Wi-Fi Direct的Android文件传输研究与实现[D].东华大学,计算机技术（专业学位）,2014,硕士.
[12]赖碧瑛.高校学生宿舍网络管理存在的主要问题和对策研究[J].广西教育学院学报,2014,02:148-149.
[13]生春林.兰州机车公司多元化发展战略研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[14]刘晓雯.个案社会工作介入高考落榜生心理调适的研究[D].西北大学,社会工作（专业学位）,2014,硕士.
[15]林嫔,贺昌政.面向并行工程的客户关系管理[J].管理评论,2004,01:50-54+44-64.
[16]廖佳,胡玉玲,李攻科.基于贵金属纳米粒子的SERS活性基底研究进展[J].分析科学学报,2015,01:131-138.
[17]朱宏,钟守铭.具有无穷时滞的不确定大系统的鲁棒镇定[J].控制与决策,2002,05:604-606.
[18]高阳,陈世福,陆鑫.强化学习研究综述[J].自动化学报,2004,01:86-100.
[19]王维萍.基于衰减属性的地震波正演模拟及其在储层预测中的应用[D].中国地质大学（北京）,应用数学,2014,硕士.
[20]李宏林.村民委员会职能的立法研究[D].内蒙古大学,法律,2014,硕士.
[21]彭朝晖.数据挖掘技术在商业银行客户关系管理中的应用[J].株洲工学院学报,2003,04:107-109.
[22]姚行正.贵州岩溶景区旅游开发、管理与国际接轨模式研究[D].贵州师范大学,自然地理学,2004,硕士.
[23]李红娟.转Gbve1基因拟南芥对黄萎菌的抗性和机制研究[D].南京农业大学,植物病理学,2013,硕士.
[24]郭成钢.客户关系管理——在商业企业中的实现[D].东北财经大学,2003.
[25]王豫炜.城市垃圾回收嵌入式车载系统设计[D].北京化工大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[26]张道新.“A+的+H”类组合式定中结构的认知分析[D].辽宁师范大学,汉语言文字学,2003,硕士.
[27]宁涛,袁平.1700mm冷轧机开卷机电气控制系统分析[J].有色冶金设计与研究.2003(S1)
[28]刘璞迪.可控电抗器在无功补偿中的应用与研究[D].西安科技大学,电力电子与电力传动,2013,硕士.
[29]郑梦思.偏振膜的设计研究及制备[D].西南交通大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[30]PATHAMMAVONGPHONESILI.探究老挝食品与饮料特许经营权发展机遇[D].宁波大学,MasterofBusinessAdministration（专业学位）,2012,硕士.
[31]马凤莲.饲喂不同纤维分解菌对鹅肠道菌群多样性的影响[D].吉林农业大学,动物营养与饲料科学,2012,硕士.
[32]王驹,陈伟明,苏锐,郭永海,金远新.高放废物地质处置及其若干关键科学问题[J].岩石力学与工程学报,2006,04:801-812.
[33]何琦.请求权竞合理论比较研究[D].复旦大学,诉讼法学,2012,硕士.
[34]杨明.基于特殊角点的特征线段的立体匹配的研究[D].辽宁大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[35]宋莹莹.中医药治疗排卵障碍性不孕的系统评价[D].成都中医药大学,中医妇科学,2012,硕士.
[36]胡振.“侵蚀效应”、干中学效应的分离与发展中国家的经济增长[D].西北师范大学,区域经济学,2013,硕士.
[37]朱小娟.金塔—鼎新绿洲天然胡杨林种群结构及其动态特征研究[D].西北师范大学,自然地理学,2013,硕士.
[38]翟毅恒.传媒职业学院教务管理系统的设计与实现[D].山东大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[39]杨春光.企业核心竞争力培育研究——阜新煤矿个案分析[D].吉林大学,工商管理,2004,硕士.
[40]何谨然.旅游企业的文化营销研究[D].武汉理工大学,2002.
[41]薛达放.人类学视野下的“地藏七”研究[D].吉林大学,人类学,2014,硕士.
[42]闵青菁.中国英语教育中批判性语言—文化意识与跨文化公民教育研究[D].哈尔滨工业大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[43]吕云枫.乳房血管结构运用DCE-MRI技术的研究[D].吉林大学,外科学,2014,硕士.
[44]李伟玲.桑叶对肉羊生产性能、血液生化指标、免疫抗氧化功能和肉品质的影响[D].内蒙古农业大学,养殖,2012,硕士.
[45]于洋.基于语料库的3-6岁儿童绘本翻译语言研究[D].吉林大学,语言学及应用语言学,2014,硕士.
[46]乔静.民生银行“商贷通”业务研究[D].郑州大学,金融（专业学位）,2013,硕士.
[47]吴鹏飞.基于FPGA的LFMCW太赫兹成像系统的建模与仿真[D].河北大学,电路与系统,2014,硕士.
[48]王金水.膝关节后交叉韧带重建“锐角效应”的临床解剖学研究[D].福建医科大学,外科学,2014,硕士.
[49]运敏敏.版权默示许可制度研究[D].西南政法大学,知识产权法学（专业学位）,2012,硕士.
[50]孙玲莹.基于CdTe量子点作用下的鲁米诺电化学发光传感器的研究[D].苏州大学,分析化学,2012,硕士.