JNK介导的保护性自噬促进了p53~(-/-)或p53突变型结肠癌细胞对5-FU的耐药

【摘要】在肿瘤的形成和发展过程中,抑癌基因p53常常发生突变或缺失,而这种突变或缺失又是导致肿瘤进展和化疗耐药产生的重要原因。目前,尽管自噬在肿瘤形成过程中的促生长和促死亡作用仍存在争议,但大量体内外实验研究支持：在化疗药物所致的微环境压力下,肿瘤细胞会激发自噬作为一种保护性的机制来对抗化疗药物的细胞毒性,最终导致化疗耐药的产生。最近,越来越多的研究证实MAPK信号通路调控的自噬是引起化疗耐药的重要机制。目的：研究抗肿瘤药物5-FU在耐药的p53缺失结肠癌细胞HCT116p53-/-和p53突变结肠癌细胞HT-29中的自噬表达情况,分析其与5-FU耐药的相关性并探讨其可能的分子机制。方法：通过Westernblotting分析野生型p53(HCT116p53+/+和RKO).缺失型p53(HCT116p53-/-)和突变型p53(HT-29)四种肠癌细胞中5-FU诱导的自噬的表达情况并分析其差异；在5-FU作用条件下,通过MTT、流式细胞技术、Westernblotting.免疫荧光等方法检测HCT116p53-/-和HT-29细胞中肿瘤细胞的活力、自噬的表达水平及其可能的分子机制；通过化学药物抑制剂和siRNA技术进一步阐明HCT116p53-/-和HT-29细胞对5-FU耐药的可能分子机制。结果：在HCT116p53-/-和HT-29细胞中,5-FU诱导的自噬和JNK信号通路的活化呈现明显的浓度或时间依赖性,但在HCT116p53+/+和RKO细胞中却不存在这种现象；抑制自噬能够明显增强HCT116p53-/-和HT-29细胞对5-FU的化疗敏感性；JNK信号通路活化后能够激活Bcl-2的磷酸化进而诱导细胞自噬的发生；JNK特异性抑制剂SP600125和JNKsiRNA抑制JNK的活性或表达后,5-FU诱导的细胞自噬明显下调,HCT116p53-/-和HT-29细胞对5-FU的敏感性明显增强。结论：JNK/Bcl-2磷酸化介导的保护性自噬是HCT116p53-/-和HT-29细胞对5-FU耐药的可能分子机制。这将为p53基因突变型结肠癌患者的化疗提供一种提高5-FU治疗效果的策略。
【作者】孔娜；
【导师】潘宏铭；
【作者基本信息】浙江大学，肿瘤学，2014，硕士
【关键词】JNK；Bcl-2；5-FU；化疗耐药；p53；结肠癌；保护性自噬；

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