人巨细胞病毒特异性CD8+T细胞在异基因造血干细胞移植受者中的免疫应答

【摘要】背景人巨细胞病毒(HumanCytomegalovirus,HCMV)在原发性感染免疫功能健全的人群后潜伏于骨髓系细胞、平滑肌细胞、内皮细胞等细胞。当机体免疫功能受损时,潜伏的HCMV易发生激活,严重者可引起致死性肺炎、肝炎。尤其患者在异基因造血干细胞移植(AllogeneicHaematopoieticStemCellTransplantation,allo-HSCT)术后,HCMV激活是一种常见的并发症。特异性细胞免疫应答尤其是CD8+T细胞对HCMV感染的控制和疾病的恢复起关键性作用。因此,评价allo-HSCT术后HCMV特异性CD8+T细胞的数量和功能状态可能对于预防HCMV激活发挥重要作用,有助于阐明HCMV特异性T细胞免疫应答机制。方法和目的选择2009年9月至2012年10月期间在我院行异基因造血干细胞移植HLA-A*0201受者21例。采集EDTA抗凝外周血标本,移植后100天内每周采集1次,100天之后每月采集1次,共采集484份标本。采用间接酶免疫组化法常规检测外周血白细胞HCMVpp65抗原血症；采用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)检测病人移植前HCMV特异性抗体IgG和IgM血清学状态；应用HLA-肽五聚体染色技术定量测定HCMVpp65495-503特异性CD8+T细胞的水平；同时应用IFN-y酶联免疫斑点实验(Enzyme-linkedImmunospot,ELISPOT)分析pp65495-503特异性CD8+T细胞的功能状态；从数量和功能上综合评价异基因造血干细胞移植术后HCMV特异性CD8+T细胞在控制HCMV激活中的作用,进而阐明HCMV特异性T细胞免疫应答机理。结果1.采集21例异基因造血干细胞移植HLA-A*0201患者的外周血标本,抗原血症阳性时pp65495-503特异性CD8+T细胞的绝对数的平均值是54.5/μl,抗原血症阴性时pp65495-503特异性CD8+T细胞的绝对数的平均值是40.5/μl,两组pp65495-503特异性CD8+T细胞的绝对数没有明显差异(p>0.05)。2.移植后90天,pp65495-503特异性CD8+T细胞维持在大于20/μl的水平。3.抗原血症阳性时分泌IFN-y的T细胞的斑点数的平均值是507/2.5×105PBMCs,抗原血症阴性时分泌IFN-γ的T细胞的斑点数的平均值是216/2.5×105PBMCs,两组分泌IFN-γ的T细胞的斑点数存在明显差异(p<0.05)。结论1.pp65495-503特异性CD8+T细胞在异基因造血干细胞移植术后不能防止HCMV抗原血症的发生。2.应用五聚体技术和ELISPOT在评价人巨细胞病毒特异性T细胞中具有重要价值。
【作者】刘安兵；
【导师】范骏；
【作者基本信息】浙江大学，临床检验诊断学，2014，硕士
【关键词】人巨细胞病毒；CD8+T细胞；异基因造血干细胞移植；五聚体；酶联免疫斑点实验；

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