mir-126调控VEGF与卵巢癌细胞侵袭相关的研究

【摘要】研究背景和目的：卵巢癌是妇科常见肿瘤之一,其早期症状隐匿,因此大多数卵巢癌患者在确诊时已经是癌症晚期。卵巢癌具有较强的恶性生物学行为,易发生腹腔内的广泛种植,已成为影响妇女生命的最主要的肿瘤之一。miRNA是真核细胞内的非编码微小RNA,大量研究表明miRNA与多种肿瘤的发生、发展密切相关,其可能发挥着抑癌基因或癌基因的作用。miR-126是作为一种特异性表达的microRNA,它能够通过调控VEGF等基因的表达参与调控血管发育,新生血管形成以及血管炎症反应等血管的生理和病理生理过程。研究表明miR-126可以抑制多种肿瘤的增殖和转移,如肺癌,乳腺癌,结肠癌等,提示miR-126可能具有潜在的抑癌基因作用。肿瘤的发生发展与肿瘤新生血管的形成密不可分,而VEGF是肿瘤血管生成中特异性的促血管生成因子,其具有很强的促进肿瘤新生血管形成的能力。已有研究表明miR-126可以抑制VEGF的表达,是VEGF表达的调控因子,但其在卵巢癌中的作用尚未阐明。本研究通过体外培养SKOV3卵巢癌细胞株,同时转染miR-126的基因片段,以揭示miR-126靶向调控VEGF在卵巢癌侵袭转移中的作用。研究材料和方法培养人卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3,通过慢病毒包装miR-126转染卵巢癌SKOV3细胞系,将其分为三组：转染miR-126表达组(SKOV3/LV3-has-miR-126组)、转染阴性对照组(SKOV3/LV3NC组)和空白对照组(SKOV3组),用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,通过Transwell侵袭实验观察各组细胞的侵袭能力,分析miR-126与细胞周期及卵巢癌细胞侵袭能力的关系。并通过免疫荧光、WesternBlot比较各组细胞VEGF表达量的差别,分析miR-126与VEGF表达的关系。结果：1.SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为63.9%、53.1%和34.7%,而G1细胞比例SKOV3组和SKOV3/LV3NC组相近；与SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞任一组比较,SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低而停留在G1的细胞比例则较高,表明miR-126过表达后,细胞S期合成显著抑制。2.Transwell侵袭实验结果显示SKOV3细胞侵过基质胶的穿膜细胞数在SKOV3组细胞中是248±16。与SKOV3组细胞相比较,转染阴性对照组SKOV3/LV3NC细胞侵过基质胶的穿膜细胞数没有明显改变(250±15,P>0.05),转染LV3-has-miR-126组细胞侵过基质胶的穿膜细胞数明显减少(169±12,P<0.05)。3.免疫荧光和WesternBlot实验显示SKOV3组与SKOV3/LV3NC组的细胞VEGF蛋白的表达量相近,其蛋白相对表达量分别为(71.3±2.7%和70.6±2.3%；与SKOV3组与SKOV3/LV3NC组的细胞VEGF蛋白的表达量相比,SKOV3/LV3-has-miR-126组细胞VEGF蛋白的相对表达量则为32.4±4.2%,其表达量明显比SKOV3组减少(P<0.05)。结论：1.miR-126转染的SKOV3卵巢癌细胞S期合成显著抑制,G1期细胞明显增加,同时侵过基质胶的穿膜细胞数明显减少,提示miR-126的表达可抑制卵巢癌的增殖和侵袭。2.miR-126转染的SKOV3卵巢癌细胞可抑制VEGF的表达,提示miR-126抑制卵巢癌的增殖和侵袭可能与减少VEGF的表达有关。
【作者】罗建桥；
【导师】周建维；
【作者基本信息】浙江大学，妇产科学，2013，硕士
【关键词】卵巢癌；增殖；侵袭；miR-126；VEGF；

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