辛伐他汀纳米粒对脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

【摘要】目的：初步尝试辛伐他汀纳米粒的制备,研究其理化性质,并探讨其对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激的体外培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：(1)采用溶剂扩散法方法制备辛伐他汀纳米粒,粒度与Zeta电位分析仪测定纳米粒粒径,以高效液相色谱法测定药物包封率和载药量。(2)采用胰酶消化法进行人脐静脉内皮细胞的培养,以免疫组化法对内皮细胞进行鉴定。(3)通过LPS刺激脐静脉内皮细胞制造脓毒症细胞模型,分为空白对照组,LPS组,辛伐他汀静脉制剂组(LPS+辛伐他汀静脉制剂)及辛伐他汀纳米粒组(LPS+辛伐他汀纳米粒),培养6h,12h,24h,予MTT法检测细胞活性。共培养12h后流式细胞仪检测细胞调亡率,并用蛋白印迹法(westernblot)检测四组Bcl-2及Bax蛋白的表达。结果：(1)采用溶剂扩散法成功制备辛伐他汀纳米粒,测其直径在350.3±156.9nm,包封率65.71%,载药量3.29%。(2)原代脐静脉内皮细胞梭形,连接呈片后显现内皮细胞形状,呈铺路石样。人脐静脉内皮细胞Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定为内皮细胞。(3)细胞活性比较：共培养6h后LPS组的细胞活性明显低于空白对照组(P<0.05),辛伐他汀静脉制剂组及辛伐他汀纳米粒组细胞活性均高于LPS组(P<0.05),辛伐他汀纳米粒组细胞活和辛伐他汀静脉制剂组活性无明显差别(P>0.05)。共培养12h及24h细胞活性比较：LPS组的细胞活性明显低于空白对照组(P<0.05),辛伐他汀静脉制剂组及辛伐他汀纳米粒组细胞活性均高于LPS组(P<0.05),辛伐他汀纳米粒组细胞活性高于辛伐他汀静脉制剂组(P<0.05)。12h和24h组间活性无明显差异。共培养12h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率结果：LPS组的凋亡率明显高于空白对照组(P<0.05),辛伐他汀静脉制剂组凋亡率及辛伐他汀纳米粒组均低于LPS组(P<0.05),辛伐他汀纳米粒组凋亡率低于辛伐他汀静脉制剂组(P<0.05).WesternBlot检测各组Bc1-2,Bax蛋白结果：LPS组Bcl-2蛋白的表达低于空白对照组(P<0.05),Bax蛋白的表达明显高于空白对照组(P<0.05)。辛伐他汀静脉制剂组及辛伐他汀纳米粒组Bcl-2蛋白的表达均高于LPS组(P<0.05),低于空白对照组((P<0.05),Bax蛋白的表达明显低于LPS组(P<0.05),高于空白对照组(P<0.05)。辛伐他汀纳米粒组Bcl-2蛋白的表达高于辛伐他汀静脉制剂组(P<0.05),Bax蛋白的表达低于辛伐他汀静脉制剂组(P<0.05)。结论：(1)采用溶剂扩散法方法制备的辛伐他汀纳米粒粒径小,包封率及载药量较好；(2)LPS可能通过降低Bcl-2蛋白表达,提高Bax蛋白表达而明显增加人脐静脉内皮细胞凋亡率；(3)辛伐他汀静脉制剂及辛伐他汀纳米粒能提高LPS刺激人脐静脉内皮细胞的活性,降低其细胞凋亡率,其可能机制为提高LPS刺激人脐静脉内皮细胞Bcl-2蛋白的表达,而降低Bax蛋白的表达,起到保护内皮细胞的作用；(4)辛伐他汀纳米粒组较辛伐他汀静脉制剂细胞活性更强,凋亡率更低,可能与辛伐他汀纳米粒组Bcl-2蛋白表达高于辛伐他汀组,而Bax蛋白表达低于辛伐他汀组有关。
【作者】俞国峰；
【导师】方强；
【作者基本信息】浙江大学，内科学，2013，硕士
【关键词】辛伐他汀；纳米粒；脂多糖；内皮细胞；脓毒症；bcl-2；bax；凋亡；

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