线粒体ATP敏感性钾通道和NADPH氧化酶参与血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞自噬

线粒体ATP敏感性钾通道和NADPH氧化酶参与血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞自噬

作者:师大云端图书馆 时间:2018-02-27 分类:参考文献 喜欢:4100
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【摘要】目的:探讨线粒体ATP敏感性钾通道和NADPH氧化酶在AngⅡ(ANGⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)自噬中的作用。方法:以VSMCs为研究对象,设立组别分别为1.空白组;2.AngⅡ组;3.ARB(AngiotensinⅡtype1receptorblocker,AngⅡI型受体抑制剂)+AngⅡ组;4.Apocycin(NADPH抑制剂,香荚兰乙酮)+AngⅡ组;5.5-HD(线粒体ATP敏感性钾离子通道抑制剂)+AngⅡ组;6.3-MA(自噬抑制剂)+AngⅡ组;7.Rapamycin(自噬促进剂)+AngⅡ组;采用MTT方法检测细胞存活率,用westernblot方法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1、P62表达量的变化,用免疫荧光的方法检测自噬小体数目的变化;用DHE染色法测定ROS含量变化,通过转染敲除自噬基因ATG-5后,用westernblot方法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1、P62表达量的变化。结果:MTT结果显示,相比空白组,加入AngⅡ及其他药物作用72h时对细胞存活率影响不大,表明这些药物作用72h时对细胞的生存活力没有造成显著的影响。Westernblot结果显示加入AngⅡ促进VSMCs的LC3-Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低,且呈现时间依赖性和浓度依赖性,同时ROS表达量增多,表明AngⅡ促进VSMCs自噬的发生。自噬抑制剂3-MA对AngⅡ(10-7mol/l,24h)引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起到抑制作用,自噬促进剂Rrapamycin对AngⅡ(10-7mol/l,24h)引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起到增强作用;敲除自噬基因ATG-5后,可消除AngⅡ所致的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低;进一步验证了AngⅡ能够诱导VSMCs自噬的发生。ARB对AngⅡ(10-7mol/l,24h)引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起到抑制作用,表明自噬是由AngⅡ通过ATI受体引起的。Apocycin对AngⅡ(10-7mol/l,24h)引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起抑制作用,表明AngⅡ通过NADPH氧化酶引起自噬。5-HD对AngⅡ(10-7mol/l,24h)引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起到抑制作用,表明线粒体ATP敏感性钾通道介导AngⅡ引起的VSMCs的自噬。同时免疫荧光的结果也与westernblot结果一致。结论:AngⅡ可通过AT1受体介导引起胞内ROS增多,导致血管平滑肌细胞自噬,机制涉及线粒体ATP敏感性钾通道和NADPH氧化酶的参与。
【作者】于康英;
【导师】王国卿;张国兴;
【作者基本信息】苏州大学,生理学,2014,硕士
【关键词】AngⅡ;VSMCs;ROS;自噬;线粒体ATP敏感性钾通道;

【参考文献】
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