TNF-α增强Doxorubicin抗肿瘤作用机制的研究

【摘要】
【作者】刘珊；
【导师】何苏丹；
【作者基本信息】苏州大学，细胞生物学，2014，硕士
【研究背景和目的】癌症是世界性的主要健康问题之一，但是现在对癌症的治疗并不乐观，化疗作为癌症治疗的一种方法，半个多世纪以来一般选用的都是细胞毒性的试剂，对正常的非正常的细胞都有杀伤作用，而且其毒性呈现剂量相关性，因此找到一种既能降低化疗药物用量又不影响其杀伤肿瘤细胞效果的方法对癌症的治疗显得尤为重要。
【研究方法】1)利用CellTiter-glo试剂盒，通过检测ATP的水平来检测细胞存活率。可以指示药物TNF-α、Doxorubicin(以下简称为Dox)分别及联合处理后对细胞的杀伤作用；2)利用siRNA即小干扰RNA转染来沉默某个基因以检测该基因在药物诱导的细胞死亡这条信号通路中是否参与；3)Westernblotting技术用来检测siRNA沉默的效果；4)免疫沉淀技术用来检测相互作用蛋白；5)动物实验：构建结肠癌细胞HCT-116的裸鼠异种移植肿瘤模型，检测药物TNF-α、Dox分别及联合处理后裸鼠肿瘤体积大小的影响。
【研究结果】1)Dox在较高浓度可引起胰腺癌细胞Panc-1死亡，但在该浓度下Dox对正常心肌细胞HL-1已产生损伤，Dox毒副作用大。2)TNF-α可以增强肿瘤细胞对Dox的敏感性。在我们选用的三种肿瘤细胞内分别是胰腺癌细胞系Panc-1、神经胶质瘤细胞系T98G、结肠癌细胞系HCT-116，均可以看到TNF-α和Dox的协同作用后对肿瘤细胞的杀伤作用更明显。3)Caspase-8参与调控TNF-α联合Dox诱导的细胞死亡信号通路。Caspase-8的沉默能明显的阻止TNF-α联合Dox引起的细胞死亡，而且TNF-α联合Dox引起的细胞死亡可以被caspase抑制剂z-VAD所抑制。4)Dox单独引起的细胞死亡与caspase-8无关，且不能被z-VAD抑制。Dox单独引起的细胞死亡依赖于溶酶体内的蛋白酶CathepsinB，CathepsinB的沉默能明显阻止Dox单独引起的细胞死亡。5)RIP1参与调控TNF-α联合Dox引起的细胞凋亡。RIP1的沉默明显阻止TNF-α联合Dox引起的细胞死亡。6)CYLD（RIP1的去泛素化酶）调控TNF-α联合Dox诱导的细胞凋亡。利用RNAi方法干扰CYLD能阻止TNF-α联合Dox诱导的细胞凋亡。7)TNF-α联合Dox诱导的细胞凋亡过程中，cIAP1/2蛋白不发生降解。8)TNF-α联合Dox可诱导RIP1/FADD/caspase-8蛋白复合体的形成。用TNF-α+Dox处理细胞后，利用caspase-8抗体进行免疫沉淀，可以检测到FADD和RIP1存在于caspase-8的蛋白复合体中。9)c-FLIP过表达能够阻止TNF-α联合DOX诱导的细胞凋亡。10)TNF-α能够增强Dox在体内的抗肿瘤作用。我们构建了一个裸鼠体内异种移植动物模型，待给药后隔天对肿瘤体积进行检测，我们发现TNF-α能够增强Dox在体内的抗肿瘤作用。
【结论】通过体内体外的实验，我们发现TNF-α能够增强Dox的抗肿瘤效果。其下游主要是通过caspase-8/FADD/RIP1/CYLD引发细胞凋亡，从而达到抗肿瘤效果。这一研究结果提示TNF-α联合Dox可以成为治疗肿瘤的强有力的候选药物。
【关键词】肿瘤治疗；Dox；TNF-α；细胞凋亡；

【参考文献】
[1]徐洁.基于卟啉模拟酶构建高效化学发光免疫分析[D].南京大学,2013.
[2]张娟.高中新课程化学实验教学现状的调查与思考[D].东北师范大学,学科教学,2012,硕士.
[3]梁世雷.国家赛艇队女子单桨运动员高原训练负荷特征的研究[D].宁波大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[4]向柏桦.论尼采美学的“酒神”内涵[D].湖北大学,文艺学,2011,硕士.
[5]申垒.盐渍土地区袋装水泥混凝土灌注桩的复合土工布研究[D].长安大学,道路与铁道工程,2013,硕士.
[6]徐礼梅.论城市房屋征收中公民的私有财产权保护[D].西南政法大学,宪法学与行政法学,2012,硕士.
[7]晁福刚.曲面嵌入图的着色及相关问题研究[D].华东师范大学,运筹学与控制论,2014,博士.
[8]许帅.复杂网络的随机矩阵理论分析[D].中国矿业大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[9]李云龙.止血材料开发及其表面功能蛋白研究[D].浙江大学,2014.
[10]韦跃峰.T形管缠绕线型设计及运动仿真系统开发[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2014,硕士.
[11]陈琳琳.小分子与血清白蛋白相互作用的研究[D].淮北师范大学,分析化学,2012,硕士.
[12]王惠琴,李明,王志祥,彭铎.小波变换的多分辨率特性在聚类分析中的应用[J].兰州理工大学学报,2004,02:96-99.
[13]赵芸,张初,刘飞,孔汶汶,何勇.采用可见/近红外光谱检测大麦叶片过氧化氢酶与过氧化物酶含量的研究[J].光谱学与光谱分析,2014,09:2382-2386.
[14]张必龙,朱光,姜大志,陈印,胡召齐.辽西医巫闾山变质核杂岩的形成过程与晚侏罗世伸展事件[J].地质论评,2011,06:779-798.
[15]郝然.米波雷达测高算法研究[D].西安电子科技大学,信号与信息处理,2012,硕士.
[16]邵鲁鹏.酸析木素分级分离及低分子量木素结构研究[D].齐鲁工业大学,制浆造纸工程,2014,硕士.
[17]张菊.大佛寺长江大桥现场监测软件的开发与应用[D].重庆大学,光学工程,2003,硕士.
[18]杨道云.《贝妲的婚姻》——哈代早期婚恋观的完善[D].广西师范大学,英语语言文学,2003,硕士.
[19]谭涯.一种网络化智能仪器设计与实现[D].武汉理工大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[20]黎辉.“省直管县”财政体制改革的实践与反思[D].华东理工大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[21]张静.中国特色社会主义国际战略理论探讨[D].江西农业大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[22]高铸烨,张京春,徐浩,史大卓,付长庚,曲丹,周雪忠.用复杂网络挖掘分析冠心病证候-治法-中药关系[J].中西医结合学报,2010,03:238-243.
[23]彭爱民.论职务犯罪侦查模式的完善[D].华中科技大学,经济法学,2013,硕士.
[24]雷钢强.PA66/UHMWPE共混合金制备与性能研究[D].天津科技大学,材料加工工程,2010,硕士.
[25]李荪.基于并行图像处理的NoC结构研究与设计[D].北京交通大学,微电子与固体电子学,2013,硕士.
[26]蒋薇.我国银行业资本约束下的信贷亲周期性研究[D].首都经济贸易大学,金融学,2014,硕士.
[27]D·I·麦克沃伊.澳大利亚吉普斯兰德盆地地震资料的速度分析[J].石油地球物理勘探,1976,S1:19.
[28]黄道超.智慧云网络动态资源适配关键技术研究[D].北京交通大学,2013.
[29]耿润杰.技术分析在中国股票市场的有效性[D].上海交通大学,金融,2013,硕士.
[30]刘振生.超临界流体辅助制备石墨烯基纳米复合材料及在燃料电池中应用的初步研究[D].青岛科技大学,2014.
[31]何双毅.面向天然气固态储运的甲烷水合物反应动力学特性研究[D].重庆大学,动力工程及工程热物理,2014,硕士.
[32]孙雪.WUM技术在e-learning中的应用研究[J].济宁师范专科学校学报,2005,06:7-9.
[33]冯亮.考虑分布式电源的配电网络重构研究[D].天津大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[34]张跃银.临床医学专业构建综合能力本位教学模式的研究[D].西南师范大学,课程与教学论,2004,硕士.
[35]蔡杨.我国白糖期货价格发现功能的实证分析[D].云南财经大学,金融（专业学位）,2014,硕士.
[36]张利燕.板栗雄花序黄酮提取物抗氧化活性及抑菌性的研究[D].内蒙古农业大学,农产品加工及贮藏工程,2013,硕士.
[37]孟杰.聚合物平面波导光开关的优化设计与制备[D].吉林大学,微电子学与固体电子学,2013,硕士.
[38]贾明武.手机8问[J].电子质量.2000(08)
[39]冯卉.弹性特征参数在乳腺结节诊断中的临床价值[D].中国人民解放军医学院,影像医学与核医学,2013,硕士.
[40]刘菲.甘肃赢在前沿企业管理服务公司的营销策略设计[D].兰州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[41]王键.天津市工程建设领域信息公开和诚信系统设计与实现[D].天津大学,软件工程,2013,硕士.
[42]郑文凯.大型商用飞机撞击核电站屏蔽厂房的荷载研究[D].清华大学,土木工程,2013,硕士.
[43]舒昕.参与式治理：基于纽约市布鲁克林区的案例研究[D].华中师范大学,中外政治制度,2012,硕士.
[44]吴金蓉.阴离子表面活性剂层状液晶中制备SAA-LDHs纳米片及其性能研究[D].青岛科技大学,2014.
[45]张文迪.广告图形中视错觉因素研究[D].河北科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[46]黄玉萍.国民收入和财政分权对政府规模的影响[D].复旦大学,财政学,2012,硕士.
[47]陈瑜.胃癌MG7-Ag模拟表位为基础构建多表位联合的基因疫苗的研究[D].第四军医大学,内科学,2004,硕士.
[48]韩丽霞.“薯贱伤农”现象分析[D].内蒙古师范大学,政治经济学,2013,硕士.
[49]胡子星.语言学习网站在英语学习中的作用[D].华中师范大学,学科教学,2013,硕士.
[50]刘飞,苏宏业,褚健.线性离散时滞系统鲁棒严格耗散控制[J].自动化学报,2002,06:897-903.