Necrostatin-1保护谷氨酸诱导的细胞死亡机制研究

【摘要】
【作者】徐雷；
【导师】何苏丹；
【作者基本信息】苏州大学，细胞生物学，2014，硕士
【研究背景和意义】：谷氨酸广泛的参与了生物体能量代谢及神经传导的过程。维持正常生理功能十分重要的氨基酸。谷氨酸在体内代谢功能的紊乱会引起多种疾病的发生。然而对其在体内产生的毒性的具体机制研究还不是很清楚。
【研究目的】研究necrostatin-1与受体相互作用蛋白激酶1（receptorinteractionproteinkinase1,RIP1）及受体相互作用蛋白激酶3（receptorinteractionproteinkinase3,RIP3）在谷氨酸诱导的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）与海马神经元（HT22）毒性中发挥的作用。
【研究方法】在用谷氨酸或TNF-诱导后，检测野生型及RIP3缺失型小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）以及HT22细胞的存活率，以探明它们对谷氨酸或TNF-的敏感度。通过siRNA干扰将TNF-诱导的坏死通路中的关键蛋白RIP1沉默，或通过药物necrostatin-1预处理，后加入谷氨酸或TNF-诱导，观察RIP1的下调与necrostatin-1预处理对谷氨酸或TNF-诱导的细胞死亡的影响是否一致。并用westernblot检测其siRNA的干扰效率。利用RIP3缺失的MEF细胞，以及通过用siRNA干扰降低RIP3表达的HT22细胞，检测RIP3的缺失或下调对谷氨酸或TNF-诱导的细胞死亡的影响，以判断TNF-诱导坏死的关键蛋白RIP3是否参与谷氨酸诱导的细胞死亡信号通路。通过siRNA干扰的方法下调线粒体蛋白凋亡诱导因子（apoptosisinducingfactor，AIF）的表达，以判断AIF在谷氨酸或TNF-诱导的细胞死亡中的作用；通过使用自噬及溶酶体的化学抑制剂balfilomycin-A1(BFA)，Chloroquine(CQ)，3-Methyladenine(3-MA)以及活性氧ROS的化学抑制剂butylatedhydroxyanisole(BHA)，N-acetylcysteine(NAC)以判断谷氨酸或TNF-诱导的细胞死亡与自噬或溶酶体及活性氧的关系。
【研究结果】1）在HT22和MEF细胞中，necrostatin-1都能够有效阻止谷氨酸诱导的细胞死亡,而且凋亡抑制蛋白z-VAD能促进此细胞死亡。2）在MEF和HT22细胞中，利用RNAi沉默necrostatin-1的靶蛋白RIP1能够抑制肿瘤坏死因子TNF-诱导的细胞坏死，但不影响谷氨酸诱导的细胞毒性。3）与RIP1相互作用的细胞坏死调控蛋白RIP3的敲除不能抑制谷氨酸诱导的MEF细胞死亡，但能完全阻止TNF-诱导的细胞坏死，而且，RIP3的RNAi不能抑制谷氨酸诱导的HT22细胞死亡。4）线粒体凋亡诱导因子AIF的沉默不能阻止谷氨酸诱导的HT22细胞死亡以及MEF细胞死亡。5）自噬/溶酶体抑制剂BFA和3-MA等能有效阻止谷氨酸诱导的细胞死亡，但不影响TNF-诱导的细胞坏死。6）活性氧抑制剂BHA和NAC能抑制谷氨酸以及TNF-诱导的细胞坏死。
【结论】综上所述，这些结果不仅首次证实了necrostatin-1阻止谷氨酸诱导的细胞死亡的靶点并不是RIP1，同时也提出，谷氨酸诱导的细胞死亡并不依赖于TNF诱导的细胞坏死下游的RIP1，RIP3。另外也进一步揭示其与溶酶体自噬泡的关系，并且活性氧也可能参与其下游损伤机制。
【关键词】Necrostatin-1；RIP1；RIP3；HT22；MEF；谷氨酸；

【参考文献】
[1]范笑仙,姜华,王朋,杜诗韵,李静,胡雯静,王蒙.2013年全国高等学校教育科研论文统计分析——基于14家高等教育中文核心期刊的发文统计[J].中国高教研究,2014,04:7-12.
[2]段新民.矿井提升绕线式异步电动机串电阻起动过程计算[J].电气工程应用.1987(04)
[3]宋希.浅析国际贸易中环境贸易壁垒问题与对策探析[J].商,2014,28:.
[4]周燕平.社会网络中的市场运行与包容性增长[D].华中师范大学,社会学,2014,硕士.
[5]陈玉娇.基于分簇的无线传感器网络的安全路由算法研究[D].西南交通大学,信息安全,2013,硕士.
[6]侯紫扬.论正当程序视角下的行政程序违法[D].中国社会科学院研究生院,行政法（专业学位）,2014,硕士.
[7]向彪.EAS-21模型应用研究[D].湖南师范大学,体育人文社会学,2013,硕士.
[8]唐其彬.魏家峁露天矿内排土场边坡设计及稳定性研究[D].内蒙古科技大学,矿业工程,2014,硕士.
[9]郭峰.Android三维控件技术研究[D].华中科技大学,计算机技术,2013,硕士.
[10]黄骅隽,杨万泰,邓建平.具有荧光性能氧化石墨烯杂化材料的制备[J].中国科技论文,2015,06:638-642+658.
[11]李宝英.金融危机对我国加工贸易的影响研究[D].北京交通大学,2009.
[12]李毅松,曹阳.第四届EMS-API工作组成立大会在京召开[J].电力系统自动化,2006,16:45.
[13]郭毅.热挤压Mg-Al-Zn-xLa合金组织性能研究[D].吉林大学,材料学,2014,硕士.
[14]林琳.多媒体网络环境下任务型教学在英语专业精读课中应用研究[D].东北师范大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[15]位树.山区高速公路互通式立交变异形式及适用性[D].长安大学,交通运输工程（专业学位）,2014,硕士.
[16]陈芝国.浅论文学中的历史感现象[D].首都师范大学,文艺学,2004,硕士.
[17]赵国静.儿童文学翻译中的功能对等[D].华中师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[18]费斌.部分回流条件下波纹导向浮阀塔板的传质性能研究[D].华东理工大学,化学工程,2014,硕士.
[19]郑翔,孙海标,张炫辉,谢伟淼,李国华.蒙脱石剥离方法的对比与选择[J].矿物学报,2014,03:427-432.
[20]韩丹丹.GF公司绩效管理体系研究[D].合肥工业大学,企业管理,2013,硕士.
[21]梁婷婷.吉林省信访局公务员职业生涯管理研究[D].吉林财经大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[22]洪婧文.LTE系统中HeNB移动性增强方案研究[D].西安电子科技大学,工程,2012,硕士.
[23]彭海艳.我国房地产信托业务现状及对策研究[D].长安大学,产业经济学,2014,硕士.
[24]刘华僕.水痘减毒活疫苗及灭活疫苗经不同途径接种后免疫效果的比较分析[D].吉林大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[25]陈轶非.移动环境下序列推荐的研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[26]尹忠海.文化三维性的断裂与整合[D].华东师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2003,硕士.
[27]杨新利.审计意见与内部控制质量相关性研究[D].中国矿业大学,会计学,2014,硕士.
[28]黄旭,吕强,钱培德.一种用于蛋白质结构聚类的聚类中心选择算法[J].自动化学报,2011,06:682-692.
[29]高志刚.DBC-114在微压测量中的应用[J].冶金自动化,1986,02:59-60.
[30]魏武沁.沪深300指数与股指期货套期保值比率的实证研究[D].复旦大学,金融学,2012,硕士.
[31]李瑞敏.基于同步辐射X射线的乳腺癌及肿瘤新生血管成像的实验研究[D].复旦大学,影像医学与核医学,2013,博士.
[32]沙漠.乳酸菌发酵辣椒酱及其产品工艺研究[D].新疆农业大学,食品科学,2012,硕士.
[33]龚珍彬.纳米结构类金刚石薄膜的制备及其摩擦学性能的研究[D].兰州理工大学,2014.
[34]张松艳.抑郁症患者异常归因方式的脑神经机制[D].西南大学,基础心理学,2014,硕士.
[35]丛淼淼.基于web的数控外圆磨床加工仿真研究[D].东北大学,机械制造及其自动化,2010,硕士.
[36]雷晨明.转台低速性能分析与改进[D].哈尔滨工业大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[37]王鑫坤.磁共振扩散加权成像及动态增强扫描鉴别乏脂肪肾血管平滑肌脂肪瘤与非透明细胞肾癌[D].中国人民解放军医学院,影像医学与核医学,2013,硕士.
[38]李梦鸿.从后殖民角度分析韩素音Till Morning Comes中的汉译英现象[D].北京外国语大学,翻译,2014,硕士.
[39]张玉鹏.亚铁氰化钾为绿色氰源的α,β-不饱和酯的共轭氢氰化反应研究[D].西北师范大学,有机化学,2014,硕士.
[40]刘萍.基于SCOT的大众分类法本体构建研究[D].郑州大学,图书馆学,2013,硕士.
[41]袁锐.祛风地黄汤加减治疗寻常型银屑病（血虚风燥证）的临床观察[D].黑龙江中医药大学,中医外科学（专业学位）,2013,硕士.
[42]韩路.东北满族新城戏及其艺术特色研究[D].云南艺术学院,民族戏剧研究,2014,硕士.
[43]刘欣乐.生产要素价格变化时建设工程合同价款调整方法研究[D].长安大学,技术经济及管理,2014,硕士.
[44]刘建军.建筑结构半主动控制系统理论研究[D].天津大学,结构工程,2004,硕士.
[45]陈亮.驱动桥壳体结构声振分析与改进[D].西南交通大学,车辆工程,2013,硕士.
[46]张帆.公立高校委托代理关系的市场化改造[D].湖南师范大学,教育经济与管理,2004,硕士.
[47]陈虹,孔力,赵党军.基于粒子群优化算法的极限环极值搜索控制[J].控制与决策,2011,06:811-815.
[48]刘伟.本体异质结有机太阳能电池的数值模拟[D].郑州大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[49]侯娟.过程体裁教学法在初中英语写作教学中的应用研究[D].山东师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[50]黄思远.湖北省县域旅游发展空间差异研究[D].华中师范大学,人文地理学,2014,硕士.