内质网分子伴侣GRP78在缺血预适应激活自噬中的作用

【摘要】目的：我们的前期研究发现内质网应激诱导自噬介导了缺血预适应的神经保护作用，本研究旨在探索在神经细胞缺血预适应模型中，内质网分子伴侣GRP78与自噬激活之间的内在联系。方法：培养大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(pheochromocytomacells,PC12cells)细胞系和原代鼠皮层神经元，建立缺血预适应(ischemicpreconditioning,IPC)和缺氧缺糖(oxygen-glucosedeprivationmodel,OGD)模型，预缺血前采用BAPTA(dibromo-1,2-bis(aminophenoxy)ethaneN,N,N9,N9-tetraaceticacid，0.125－2μM)给药抑制GRP78表达，用siRNA干扰PC12细胞GRP78的表达，并用慢病毒过表达GRP78蛋白建立GRP78稳转株。采用CCK8(CellCountingKit-8)法检测细胞增殖力，免疫印迹和免疫荧光法检测内质网应激分子伴侣GRP78和自噬相关蛋白LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR以及p-p70S6K的变化，采用透射电镜观察自噬体的生成情况。结果：IPC对PC12细胞和原代神经元OGD具有保护作用，神经细胞经IPC处理12h后，GRP78、LC3和Beclin1上调，多层膜包裹的自噬体形成增加。用BAPTA抑制GRP78表达，能够取消IPC对OGD的保护作用，并降低IPC引起的GRP78、LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR的升高。GRP78siRNA亦能取消IPC对OGD的保护作用，并降低IPC引起的LC3、Beclin1升高。相反，过表达GRP78能够提高PC12细胞对OGD的耐受性，并增加LC3、Beclin1和p-AMPK的表达，但降低p-mTOR、p-p70S6K1的表达，然而，应用GRP78siRNA处理过表达GRP78的稳转株，则完全取消了LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR和p-p70S6K1的变化。结论：缺血预适应（IPC）上调GRP78，并激活自噬。抑制或干扰GRP78的表达可以取消预适应的保护作用并抑制自噬，而过表达GRP78则经由AMPK-mTOR途径激活自噬，可能由此产生对神经细胞缺血损伤的保护作用。
【作者】张向阳；
【导师】盛瑞；
【作者基本信息】苏州大学，药理学，2014，硕士
【关键词】GRP78；自噬；PC12细胞；皮层神经元；缺血预适应；缺糖缺氧损伤；BAPTA；RNA干扰；慢病毒载体；

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