PD模型大鼠神经细胞程序性凋亡通路研究及坏死性凋亡初探

【摘要】帕金森病(Parkinsonsdisease，PD)是由于黑质多巴胺（Dopamine，DA）神经元进行性丢失导致纹状体DA递质减少造成的中枢神经系统退变性疾病。目前经典的细胞死亡理论，都难以确切解释PD脑组织中这种极其缓慢的神经元丢失和大量具特征性病理改变的细胞胞体残存的现象。目的：探讨PD模型大鼠黑质、纹状体中神经细胞死亡情况（程序性凋亡及坏死性凋亡），程序性凋亡通路上关键蛋白的表达及意义；研究半胱天冬氨酸蛋白酶（Cysteinylaspartatespecificproteinase，Caspase）抑制剂（Z-VAD-fmk）对6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）毁损PD模型大鼠的神经保护作用、对神经细胞死亡方式的影响，为探究PD发病过程中DA神经元死亡确切机制、寻找PD有效治疗方法具有实际意义。方法：（1）采用立体定位于前脑内侧束（Medialforebrainbundle，MFB）注射6-OHDA的方法建立大鼠PD模型，行为学筛选出成功PD模型大鼠，应用HE染色法和Nissl染色法对PD模型大鼠神经元进行病理学和形态学观察。（2）免疫组织化学标记检测PD大鼠凋亡通路中TNF-α、P53、P21、Bcl-2/Bax、Casepase-3的表达变化；（3）改良大鼠大脑置管方法，在大鼠大脑的MFB部位埋植套管，通过套管给予6-OHDA造模PD模型大鼠。实验动物分组：空白对照组(生理盐水)，PD模型组(6-OHDA+5%DMSO)，药物干预组(6-OHDA+Z-VAD-fmk)；行为学筛选出成功PD模型大鼠，药物干预组将Caspase抑制剂Z-VAD-fmk通过套管注射入PD大鼠MFB中，每天一次。对照组及PD模型组每天给予等量5%DMSO（Z-VAD-fmk溶剂）；（4）形态学检测：Nissl染色法观察PD模型大鼠注射Z-VAD-fmk后神经元丢失情况，电镜观察各种大鼠神经细胞超微机构的变化；（5）Real-timePCR检测各组大鼠Bcl-2/Bax、RIP1、RIP3mRNA的表达变化。结果：(1)注射6-OHDA2周后PD大鼠出现明显的典型旋转行为，Nissl染色及TH免疫组织化学染色标记显示PD模型大鼠毁损侧黑质致密部神经元数量锐减（P<0.01）；(2)与对照组相比，PD模型组黑质及纹状体中TNF-α、P53、P21、Bax、Casepase-3表达上调，具有显著差异（P<0.05或P<0.01），Bcl-2表达下调（P<0.01）；(3)注射Caspase抑制剂Z-VAD-fmk后，PD大鼠模型动物行为学得到改善，黑质神经元丢失得到缓解，同时Bcl-2/BaxmRNA的表达上调；（4）电镜结果显示，Z-VAD-fmk在一定程度上能改善6-OHDA毁损所导致的线粒体减少、肿胀等超微结构上的变化，但部分胶质细胞出现水肿现象；（5）与模型组相比，药物干预组黑质RIP1，RIP3mRNA表达上升（P<0.05），提示Z-VAD-fmk可能通过促进活化的胶质细胞坏死性凋亡（Necroptosis）而保护神经元。结论：（1）PD大鼠模型黑质及纹状体神经细胞以程序性凋亡为主；（2）给予Z-VAD-fmk后，PD大鼠模型黑质神经细胞程序性凋亡在一定程度上被抑制，出现了胶质细胞坏死性凋亡；（3）Z-VAD-fmk可能通过促进活化的胶质细胞坏死性凋亡而保护神经元。
【作者】尹秀华；
【导师】孙茂民；
【作者基本信息】苏州大学，免疫学，2014，硕士
【关键词】帕金森病；6-OHDA；Bcl-2/Bax；Z-VAD-fmk；程序性凋亡；坏死性凋亡；大鼠；

【参考文献】
[1]唐荣丽.深圳大运中心场馆赛后利用研究[D].北京体育大学,体育人文社会学,2012,硕士.
[2]张怡.工程项目承发包价格研究[D].河海大学,技术经济及管理,2004,硕士.
[3]李永刚.密云水库浮游生物底栖动物群落结构及生物多样性研究[D].中国农业科学院,农村与区域发展（专业学位）,2013,硕士.
[4]郭志涛,郭忠,王振.基于Android平台的智能医疗系统的设计与实现[J].郑州大学学报(工学版),2014,06:60-63.
[5]董海丰.李玲玲“蝶梦扬琴”的改革与实践[D].内蒙古大学,音乐学,2013,硕士.
[6]钱鹏翔.基于“知与行”关系范畴的医患关系问题研究[D].广州中医药大学,科学技术哲学,2013,硕士.
[7]陈秀琼.一种融合粗集理论和神经网络的分类数据挖掘算法[J].三明学院学报,2005,02:71-75.
[8]李玲玲,马东娟,李志刚.基于状态监测数据的电器电接触性能评估[J].机械工程学报.
[9]徐广华.内蒙古地区银行卡产业发展战略研究[D].内蒙古大学,高级管理人员工商管理,2013,硕士.
[10]张冰冰.黑龙江省农村土地流转的金融支持研究[D].哈尔滨工业大学,金融,2014,硕士.
[11]金灵灵.地质勘查成果的法律属性及其权益研究[D].中国地质大学（北京）,环境与资源保护法学,2013,硕士.
[12]杨帅.数据库网格中分布式查询算法与实现的研究[D].哈尔滨工程大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[13]王玉静.4,4’-二羟基联苯合成技术研究[D].合肥工业大学,化学工艺,2013,硕士.
[14]韩媛媛.人车城—经济转型后人口与汽车快速增长下的北京与莫斯科城市形态比较[D].北京交通大学,2014.
[15]别翌荟.基于交通流优化的终端区容量提升研究[D].南京航空航天大学,交通运输规划与管理,2014,硕士.
[16]庄晓梅.农民工就业权益保障中的政府责任研究[D].吉林大学,行政管理,2013,硕士.
[17]李鹏鹏.自吸式三支管射流曝气器数值模拟及试验研究[D].浙江理工大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[18]刘迎.图像局部不变特征提取研究[D].浙江工业大学,2012.
[19]林王坚.高速转矩测量系统的研究[D].浙江工业大学,2008.
[20]刘强,宋龙亚,张忠夫.激光刻划图像格式的分析与识别处理[J].机电一体化.1997(04)
[21]黄梦.杭州市创意产业发展研究[D].山西师范大学,区域经济学,2014,硕士.
[22]ZhangShuang.The Effects of Topic Familiarity and English Language Proficiency on Chinese English Majors’ Listening Comprehension[D].西安外国语大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[23]张越,刘炯,王浩,张亮.基于物联网的啤酒糖化自动控制系统设计研发[J].酿酒科技.
[24]王世杰.网络商务技术拓展研究[J].广州航海高等专科学校学报,2002,02:15-18.
[25]刘筱清.地理学科发展教育探论[D].湖南师范大学,课程与教学论,2004,硕士.
[26]孙勇.栀子苷对LPS诱发的小鼠乳腺炎性损伤保护效果的研究[D].吉林大学,临床兽医学,2014,硕士.
[27]苏德祥.《舌尖上的中国》讲解词英译及其翻译报告[D].曲阜师范大学,翻译（专业学位）,2013,硕士.
[28]田源.高分子热熔料改善橡胶沥青混合料用于重载路面技术研究[D].长安大学,道路与铁道工程,2013,硕士.
[29]胡建军.基于节能发电调度和国际贸易理念的电力市场竞争机制[J].电力系统自动化,2008,24:35-38+73.
[30]程琬清.英语政治演讲语篇的人际功能分析[D].山东大学,英语语言文学,2013,硕士.
[31]李骞.CT增强及容积灌注成像在兔肝VX2肿瘤射频消融早期评价中的应用研究[D].华中科技大学,影像医学与核医学,2013,硕士.
[32]王平.电视法制信息传播与农民法律意识培育研究[D].南京师范大学,新闻学,2014,博士.
[33]张辉.学校在未成年学生伤害事故中的民事法律责任研究[D].山东师范大学,教育管理,2003,硕士.
[34]刘小平.三维超声心动图最佳切面自动检测.上海交通大学,2009.
[35]王勇,高金源.时变调参控制系统的稳定裕度[J].控制与决策,2000,06:695-698.
[36]徐倩青.EVA理论体系及实践应用[D].天津大学,工商管理,2004,硕士.
[37]苏振南.孙子兵法战略思想对篮球比赛临场战术选择的启示研究[D].河北师范大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[38]朱卫平,王秀丽,王锡凡.考虑输变设备的分频风力发电系统最优控制[J].电力系统自动化,2010,02:93-97+112.
[39]车焕莉.疏肝益肾方对TAM耐药乳腺癌HER2-MAPK-ERα通路的作用[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[40]邓丽.政府干预对我国中小板公司投资行为的影响分析[D].江西财经大学,金融学,2013,硕士.
[41]汪超.机械通风逆流盐水冷却塔节水性能的实验研究[D].浙江大学,工程热物理,2013,硕士.
[42]陈红.新时期小说中的仪式书写及其意义[D].西南大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[43]蒋琴.游客购买旅游商品的影响因素与旅游动机的关联度研究[D].湖南师范大学,旅游管理,2013,硕士.
[44]段晓磊.基于SESAM的锁模光纤激光器研究[D].北京交通大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[45]姜君.锂离子电池串并联成组优化研究[D].北京交通大学,2013.
[46]罗公亮.智能技术与自动化——基本概念与新发展[J].冶金自动化,2001,03:8-14.
[47]刘继伟.D.什特紫青霉降解沙棘籽原花色素的研究[D].黑龙江大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[48]罗伯特B.史密斯,约翰E.沃诺克.地球物理学中的计算机作图[J].石油地球物理勘探,1974,06:14-25.
[49]胡文闻.网络文化发展视视阈下当代中国马克思主义大众化传播研究[D].华中师范大学,马克思主义中国化研究,2014,硕士.
[50]于瑞.俄语限定主从复合句研究[D].上海外国语大学,俄语语言文学,2013,硕士.