非小细胞肺癌患者的T淋巴细胞亚群分析及相关因子的表达研究

非小细胞肺癌患者的T淋巴细胞亚群分析及相关因子的表达研究

作者:师大云端图书馆 时间:2018-05-01 分类:参考文献 喜欢:3312
师大云端图书馆

【摘要】目的通过分析非小细胞肺癌(Non-small-cellcarcinomaNSCLC)患者外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-L1和PD-1的表达,Th1和Th2细胞水平及辅助T淋巴细胞相关因子IL-12、IFN-γ和IL-10的表达,并检测肿瘤相关调控基因Bcl-2、NF-κB和TNF-αmRNA的表达水平,研究NSCLC患者术前术后T淋巴细胞亚群的变化及相关调控基因的作用机制,为临床上对NSCLC疾病的预防、诊断及治疗提供参考依据。方法针对NSCLC患者60名、肺部良性肿瘤患者40名及50名正常对照组分别获得血样。第一部分,其中一份血样EDTA抗凝处理采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的含量和百分比以及Th1和Th2细胞水平,并且用血细胞分析仪检测其淋巴细胞绝对值。第二部分,其中第二份血样离心取血清采用ELISA方法检测辅助性T细胞因子IL-12、IFN-γ和IL-10的表达,以及前面的EDTA抗凝血采用流式细胞术检测T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-L1和PD-1的表达。第三部分,其中第三份血样采用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,并提取总RNA采用Real-timePCR技术检测肿瘤相关调控基因Bcl-2、NF-κB和TNF-αmRNA的表达水平。结果第一部分,正常对照组CD3+T细胞百分含量总体高于良性和NSCLC组,其中良性术后显著低于术前和正常对照组(P<0.01),NSCLC术前和术后1-3天显著低于正常对照组(P<0.01),NSCLC术后4-7天显著高于良性术后(P<0.01);正常对照组CD4+T细胞百分含量稍低于良性组,但高于NSCLC组,其中NSCLC术前术后均显著低于正常对照组和良性术前组(P<0.01),NSCLC术后1-3天显著低于良性术后(P<0.01);正常对照组CD8+T细胞百分含量要低于良性和NSCLC组,其中NSCLC术前和术后1-3天均显著高于正常对照组和良性组(P<0.05)(P<0.01);正常对照组CD4+/CD8+比值高于良性组和NSCLC组,其中NSCLC术前和术后1-3天均显著低于正常对照组和良性组(P<0.01)(P<0.05)。正常对照组CD3+T细胞绝对值高于良性和NSCLC组,其中良性术后显著低于术前和正常对照组(P<0.01),NSCLC术后1-3天显著低于正常对照组、良性术前和NSCLC术前组(P<0.01),NSCLC术后4-7天显著低于正常对照组(P<0.05);正常对照组CD4+T细胞绝对值高于良性和NSCLC组,其中正常对照组和良性术前组均显著高于良性术后和NSCLC术前术后组(P<0.01);正常对照组CD8+T细胞绝对值低于良性和NSCLC术前组,而高于术后组,其中NSCLC术前显著高于正常对照组和良性术后组(P<0.05),术后1-3天显著低于正常对照组、良性术前和NSCLC术前组(P<0.01),NSCLC术后4-7天分别显著低于术前而高于术后1-3天组(P<0.05)。正常对照组Th1细胞含量低于良性术前而高于其他组,其中良性术前显著高于正常对照组(P<0.01),良性术后显著低于术前(P<0.01),NSCLC术前和术后均显著低于正常对照组和良性术前组(P<0.01);正常对照组Th2细胞含量高于良性术前和术后而低于NSCLC术前和术后组,其中NSCLC术前显著高于正常对照组、良性术前和术后组(P<0.05)(P<0.01),NSCLC术后组均显著高于良性术后组(P<0.01);正常对照组Th1/Th2比值低于良性术前而高于NSCLC术前和术后组,其中正常对照组显著低于良性术前而显著高于NSCLC术前(P<0.01),NSCLC术后1-3天显著低于良性术前和术后组(P<0.01)。第二部分,正常对照组CD4+CD28+T细胞百分含量略低于良性术前组,但高于其他组,其中NSCLC术前和术后1-3天均显著低于正常对照组和良性术前(P<0.01);正常对照组CD8+CD28+T细胞百分含量高于其他各组,其中正常对照组显著高于NSCLC术前和术后组(P<0.01);正常对照组CD4+CTLA-4+T细胞百分含量低于其他各组,其中NSCLC术前显著高于正常对照组(P<0.05);正常对照组CD8+CTLA-4+T细胞百分含量低于其他各组,其中NSCLC术前显著高于正常对照组(P<0.01),NSCLC术后4-7天显著低于术前(P<0.01);正常对照组CD4+PD-L1+T细胞百分含量高于良性术后组而低于其他各组,其中NSCLC术前显著高于正常对照组(P<0.05);正常对照组CD8+PD-L1+T细胞百分含量均低于其他各组,其中良性术前、NSCLC术前和术后4-7天均显著高于正常对照组(P<0.05)(P<0.01),NSCLC术前显著高于良性术前(P<0.01)。正常对照组CD4+PD-1+T细胞百分含量高于NSCLC术后4-7天而低于其他各组,其中NSCLC术前和术后1-3天显著高于正常对照组(P<0.05)(P<0.01),NSCLC术后4-7天显著低于NSCLC术前和术后1-3天(P<0.01)(P<0.05);正常对照组CD8+PD-1+T细胞百分含量均低于其他各组,其中NSCLC术前和术后1-3天均显著高于正常对照组(P<0.01)(P<0.05)。正常对照组CD4+CD28+T细胞绝对值低于良性术前而高于其他组,其中良性术后和NSCLC术前术后均显著低于正常对照组(P<0.01)(P<0.05),NSCLC术后1-3天显著低于术前(P<0.05),NSCLC术后4-7天显著高于术后1-3天(P<0.05);正常对照组CD8+CD28+T细胞绝对值高于其他组,其中对照组均显著高于NSCLC术前和术后组(P<0.05)(P<0.01);正常对照组CD4+CTLA-4+T细胞绝对值低于其他组,其中NSCLC术前显著高于正常对照组(P<0.01);正常对照组CD8+CTLA-4+T细胞绝对值显著低于其他组,其中NSCLC术前和术后1-3天显著高于正常对照组(P<0.01);正常对照组CD4+PD-L1+T细胞绝对值显著低于其他组,其中NSCLC术前和术后1-3天显著高于正常对照组(P<0.01);正常对照组CD8+PD-L1+T细胞绝对值低于其他组,其中NSCLC术前和术后1-3天显著高于正常对照组(P<0.01);正常对照组CD4+PD-1+T细胞绝对值低于其他组,其中NSCLC术前和术后显著高于正常对照组(P<0.01)(P<0.05);正常对照组CD8+PD-1+T细胞绝对值均低于其他组,其中NSCLC术前和术后组显著高于正常对照组(P<0.01),NSCLC术前显著高于良性术后(P<0.01)。IL-12ELISA检测标准曲线趋势良好。正常对照组IL-12低于良性术前术后组而高于其他组,其中良性术前显著高于正常对照组(P<0.05),NSCLC术前和术后组均显著低于正常对照组、良性术前和术后组(P<0.05)(P<0.01),NSCLC术后1-3天显著低于术前(P<0.05),NSCLC术后4-7天显著高于术后1-3天(P<0.05)。IFN-γELISA检测标准曲线趋势良好。正常对照组IFN-γ高于良性术后组而低于其他组,其中NSCLC术前和术后4-7天组均显著高于正常对照组、良性术前和术后组(P<0.05),NSCLC术后1-3天显著低于术前(P<0.05)。IL-10ELISA检测标准曲线趋势良好。正常对照组IL-10高于良性术前术后组而低于其他组,其中良性术前显著低于正常对照组(P<0.05),NSCLC术前和术后4-7天组均显著高于正常对照组、良性术前和术后组(P<0.05)(P<0.01),NSCLC术后1-3天显著高于良性术前术后和NSCLC术前组(P<0.05)。第三部分,Bcl-2基因的扩增曲线和熔解曲线良好,扩增效率高,特异性好。正常对照组Bcl-2基因表达低于良性和NSCLC术前术后组,其中正常对照组显著低于良性术前术后和NSCLC术前术后组(P<0.01),NSCLC术前显著高于良性术前和术后组(P<0.01),NSCLC术后1-3天和4-7天均显著低于NSCLC术前组(P<0.01)。NF-κB基因的扩增曲线和熔解曲线良好,扩增效率高,特异性好。正常对照组NF-κB基因表达低于良性和NSCLC术前术后组,其中正常对照组显著低于良性术前术后和NSCLC术前术后组(P<0.01),NSCLC术前显著高于良性术前和术后组(P<0.01),NSCLC术后1-3天和4-7天均显著低于NSCLC术前组(P<0.01)。TNF-α基因的扩增曲线和熔解曲线良好,扩增效率高,特异性好。正常对照组TNF-α基因表达低于良性和NSCLC术前术后组,其中正常对照组显著低于NSCLC术前术后组(P<0.01),NSCLC术前显著高于正常对照组、良性术前和术后组(P<0.01),NSCLC术后1-3天显著低于NSCLC术前组(P<0.01)。NSCLC术后4-7天显著高于正常对照组、良性术前术后组(P<0.01)。结论1.NSCLC患者T淋巴细胞相关免疫系统紊乱,其术后有趋于改善的效果,CD3+T细胞、CD4+T细胞较正常组含量及百分比均下降,CD8+T细胞较正常组含量及百分比上升,CD4+/CD8+比值在NSCLC患者中显著下降。2.NSCLC患者免疫力下降,CD8+CD28+T细胞的数量显著下降,杀伤性T细胞减少。CTLA-4、PD-L1及PD-1等相关共刺激分子在患者体内均有不同程度上调。3.NSCLC患者体内Th1与Th2辅助性T淋巴细胞比例失衡,良性组向Th1漂移,肺癌组向Th2漂移。4.NSCLC患者体内能够上调免疫调节因子监控癌细胞,尽管癌细胞有免疫逃逸机制,IFN-γ和IL-10均上调而IL-12下调。5.NSCLC患者体内免疫监控系统与癌细胞博弈,TNF-α基因高表达,而癌细胞影响体内淋巴细胞相关凋亡基因异常表达,抗凋亡基因Bcl-2基因高表达,从而有利于癌细胞在体内的生存,同时体内和转录因子NF-κB基因处于高表达状态。
【作者】钱忠萍;
【导师】顾宗江;
【作者基本信息】苏州大学,免疫学,2014,硕士
【关键词】非小细胞肺癌;T淋巴细胞亚群;免疫系统紊乱;免疫调节因子;基因异常表达;

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