大豆悬浮细胞培养及作为外源基因转化受体的研究

【摘要】大豆是一种重要的农作物，富含蛋白质、植物油及多种人体生理有益成分，营养价值极高，在粮食生产中占有重要的位置。随着人口的增长、生活水平的提高，人们对大豆的产量和质量有了更高的要求。自1988年第一株转基因大豆成功以来，许多研究者对大豆进行了转基因的尝试，试图通过转基因技术以实现大豆品种的改良，但获得成功的实例较少。建立稳定、高效的大豆遗传转化体系，获得高产高品质的大豆品种，仍旧是国内外学者的一个研究热点。硼是植物生长发育的一种必需微量元素，在维持植物细胞壁的结构和功能等方面有着重要的作用。本实验以吉林小粒7号大豆品种为材料，切取无菌幼苗下胚轴诱导愈伤组织，初步建立了大豆悬浮细胞系，测定不同硼酸浓度下悬浮细胞生长变化；采用农杆菌介导法对大豆悬浮细胞进行外源GUS基因的转化，先通过不同程度的超声处理确定最佳超声时长，然后在最佳超声处理时长的基础上，探讨了硼酸浓度对转化效率的影响；最后采用PCR和Southernblot杂交对抗性愈伤做分子鉴定。结果表明：1、大豆下胚轴外植体诱导的愈伤组织比子叶节好，最佳培养基配方为MSB+2,4-D0.8mg/L+KT0.6mg/L，此时得到的愈伤的个体大、颜色浅黄、结构松散，可建立起稳定的大豆悬浮细胞系。2、大豆悬浮细胞培养过程中，硼酸浓度为正常浓度（6.2mg/L）时，大豆悬浮细胞生长过渡期最短，呈均一的球形；略微提升浓度至10mg/L时，过渡期延长，但生长最大值比正常硼酸浓度下高；而硼酸浓度过低或过高时，细胞的生长受到抑制，形态发生变异，呈长条状。3、农杆菌介导的大豆悬浮细胞遗传转化，超声处理3min时，GUS染色细胞团块的个数最多为25个，相对其它时长重复偏差小，稳定性好。在此基础上，适当增加硼酸浓度（10～30mg/L）能够提高悬浮细胞的转化效率，并且有助于转化组织的筛选，其中30mg/L硼酸浓度下转化效率达到1mg转化细胞团中含28个转化个体。
【作者】方星；
【导师】孟祥勋；
【作者基本信息】苏州大学，遗传学，2014，硕士
【关键词】大豆；悬浮细胞；硼酸；农杆菌介导；转基因；

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