祛风清热、活血通络法对人滑膜细胞增殖和凋亡的影响

【摘要】目的：确立祛风清热、活血通络法。制备含金边祛风饮的含药血清，用含药血清刺激滑膜细胞，用MTT法、流式细胞术等方法检测其含药血清对滑膜细胞起到的作用，用比色法检测不同浓度的金边祛风饮含药血清作用于滑膜细胞后对Caspase-3活性影响。进一步说明金边祛风饮治疗痹症疗效确切，为金边祛风饮在临床上应用提供可靠实验依据。方法：（1）确立金边祛风饮治疗痹症的治则治法，理论探讨祛风清热、活血通络法。（2）饲养雌性SD大鼠30只用于提取含药血清所需。（3）将30只雌性SD大鼠随机分为三组，每组分别灌服不同浓度的金边祛风饮、雷公藤及生理盐水做对照。观察SD大鼠的活动、饮食、睡眠等一般情况，后采取眼球取血，获得金边祛风饮含药血清。（4）将我院进行髋关节置换的RA患者的滑膜及OA患者的滑膜组织进行细胞培养，采用3-4代滑膜细胞实验，用不同浓度的含药血清刺激滑膜细胞，同时与灌服雷公藤组、生理盐水组进行比较。（5）用MTT法检测对滑膜细胞增殖的影响、流式细胞仪等检测对滑膜细胞周期及凋亡的影响。证实金边祛风饮含药血清能促进类风湿关节炎滑膜细胞凋亡，而对骨关节炎滑膜细胞效果略差。（6）用比色法检测不同浓度的金边祛风饮含药血清作用于滑膜细胞后对Caspase-3活性的影响，探讨诱导凋亡发生的机制及作用环节。结果：（1）MTT结果显示：不同浓度的金边祛风饮对RA滑膜成纤维细胞增殖均有抑制作用，尤以高剂量组明显（P<0.01)。RA各组抑制作用随时间、剂量的增高而逐渐增多，呈现时间及剂量的依耐性（P<0.05)。OA滑膜细胞在低剂量作用下抑制作用不明显，但随着剂量增大和时间延长，对滑膜细胞有较轻的抑制的作用（P<0.05)。（2）流式细胞仪检测显示：金边祛风饮含药血清浓度为20μl/mL，30μl/mL，40μl/mL，50μl/mL时能明显诱导滑膜成纤维细胞发生凋亡（P<0.01）。同对照组相比，金边祛风饮含药血清组的凋亡细胞明显增多，且增多有显著统计学差异（P<0.01）。用金边祛风饮诱导RA滑膜细胞凋亡作用优于诱导骨关节炎滑膜细胞凋亡。（3）金边祛风饮能使细胞周期在G0/G1期阻滞，并且具有浓度和时间依赖性。（4）比色法检测显示：随着金边祛风饮含药血清浓度的增高，各组滑膜细胞的Caspase-3活性均逐渐增强，有效作用浓度从20umol/L开始，刺激时间越长活性增高越明显。此实验结果提示Caspase-3可能参与了金边祛风饮诱导滑膜成纤维细胞凋亡的过程，其过程可能是通过Caspase-3途径。结论：金边祛风饮能抑制滑膜细胞的生长、增殖，在一定范围内与时间、剂量呈一定相关性。金边祛风饮能使细胞周期在G0/G1期阻滞，并且具有浓度和时间依赖性。金边祛风饮能诱导滑膜细胞凋亡，其相关作用机制可能与激活Caspase-3途径有关。本试验为临床治疗RA筛选用药及剂量提供参考，以更好为广大的患者服务。
【作者】周义辉；
【导师】向阳；
【作者基本信息】湖北民族学院，中医基础理论，2014，硕士
【关键词】祛风清热；活血通络法；滑膜成纤维细胞；滑膜细胞增殖及凋亡；

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