USP22和SIRT1蛋白在肾透明细胞癌中的表达及其作用

【摘要】第一部分：USP22和SIRT1蛋白在肾透明细胞癌中的表达以及临床意义背景和目的：肾透明细胞癌为多基因异常相关肿瘤。USP22是近年来发现的肿瘤干细胞新标记蛋白,而且可能与肿瘤相关蛋白SIRT1具有相互作用,因此,我们研究肾透明细胞癌中USP22和SIRT1蛋白的表达情况以及它们与临床病理之间的联系,评判USP22和SIRT1在肾透明细胞癌发生发展中的作用。方法：基因表达网站上分析USP22,SIRT1在肾透明细胞癌中的表达情况,Westernblot比较肾癌细胞株与正常肾细胞株中USP22,SIRT1蛋白的表达差异,利用我们院2006-2007年间的肾透明细胞癌标本制作组织芯片,采用免疫组织化学方法检测USP22,SIRT1的亚细胞定位及其表达情况,结合临床病理参数及电话随访的生存情况,分析USP22,SIRT1的表达及其临床意义。结果：1、相较于正常肾组织及肾细胞系,USP22,SIRT1在肾透明细胞癌的人体标本和肿瘤细胞系中表达较高。2、成对的临床样本中显示,肾透明细胞癌的发生伴随着USP22,SIRT1高表达。3、在肾透明细胞癌的病理标本中,共定位于细胞核的USP22,SIRT1的表达与患者的年龄(是否大于60岁),肿瘤浸润深度,远处转移,临床TNM分期,病理分级紧密相关。4、总共可利用的376例临床标本中,患者的随访率为64.36%(242/376),其中,总存活201例(健康存活185例,肿瘤转移16例),死亡41例。获访的患者中TNM临床分期的Ⅰ期68.2%(165/242),Ⅱ期7.4%(18/242),Ⅱ期19.8%(48/242),Ⅳ期4.5%(11/242)。总376例手术中有根治性肾切除手术308例(开放手术266例,腔镜下42例),肾部分切除术58例(开放手术57例,腔镜下1例),肾根治+静脉切开取栓5例,肾根治切除术+肾上腺切除术3例,左肾根治+脾脏切除1例,右肾癌根治+右半结肠切除1例。患者的迄今存活率和无病生存率分别为83.1%(201/242),76.4%(185/242),患者的5年存活率和无病生存率分别为83.5%(202/242),76.9%(186/242)。5、Log-rank单因素分析显示患者的生存与患者年龄(是否大于60岁),肿瘤大小(直径是否小于8cm),肿瘤浸润深度,肿瘤是否有远处转移,肿瘤的TNM临床分期,肿瘤分级,USP22和SIRT1的表达密切相关。6、Cox多因素回归分析则发现病理分级,USP22的表达和肿瘤的浸润深度是肾透明细胞癌预后的独立危险因素,而与患者生存相关的年龄,肿瘤大小,肿瘤浸润深度,肿瘤的临床TNM分期,SIRT1等则是非独立的预后因素。7、相关性分析显示：在成对的46例标本中,无论是在正常组织还是在癌组织,USP22的表达都与SIRT1具有中度的相关性(r=0.586/0.711,p<0.01)。而在总的376例样本中,USP22与SIRT1也具有密切的相关性(r=0.379,p<0.01)。结论：共定位细胞核的USP22与SIRT1表达具有相关性,而且都与肾透明细胞癌恶性程度密切相关,暗示肾癌预后独立危险因素USP22可能协同肾癌预后影响因素的SIRT1参与了肾透明细胞癌的发病过程。它们具有病程预测和作为治疗分子靶点的潜在价值。第二部分：USP22协同SIRT1参与肾透明细胞癌发病过程的分子机制背景和目的：第一部分实验证明了共定位于细胞核的USP22和SIRT1具有表达上的相关性,而且与肾透明细胞癌临床病理参数密切相关,它们协同参与了肾透明细胞癌的发病过程,在此,研究它们相关性的原因以及参与肿瘤发生的分子机理。方法：构建含有USP22和SIRT1及其截短、失活突变体USP22C185S、SIRT1H363Y、shUSP22.shSIRTl的质粒。转染USP22和SIRT1后采用共聚焦免疫荧光显色确定USP22,SIRT1的亚细胞定位,采用免疫共沉淀分析USP22与SIRT1之间的结合情况,蛋白水平上的修饰关系,报告基因实验探讨修饰后对蛋白功能的影响。基因沉默USP22和SIRT1后分别采用CCK-8和流式细胞术判断细胞增殖,凋亡情况,并利用westernblot验证其原因,研究USP22和SIRT1蛋白对肿瘤生长的影响。结果：USP22,SIRT1,失活突变体USP22C185S,SIRT1H363Y以及USP22,SIRT1截短的编码蛋白都定位于细胞核中。USP22与SIRT1具有相互作用,并且USP22可以对SIRT1进行去泛素化修饰,抑制S1RT1的泛素化降解从而稳定SIRT1进而增强SIRT1功能的发挥。而沉默USP22,SIRT1则会上调P53,P21,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论：共定位于细胞核的USP22和SIRT1构成蛋白复合物,USP22通过去泛素化修饰来抑制SIRT1的泛素化降解,从而增强SIRT1功能的发挥。USP22协同SIRT1可能通过抑制P53,P21参与了肾透明细胞癌的发病过程。
【作者】苏锦松；
【导师】刘保池；
【作者基本信息】复旦大学，外科学，2013，博士
【关键词】USP22；SIRT1；肾透明细胞癌；生存率；去泛素化修饰；增殖；凋亡；

【参考文献】
[1]黄俊.浅谈历史文化名城建设中的景观设计[D].安徽工程大学,设计艺术学,2012,硕士.
[2]唐葆君,邱菀华,孙星.基于熵理论的企业危机预警模型研究[J].控制与决策,2009,01:113-117+121.
[3]黄向东.cNO期PTC淋巴结隐匿转移因素分析及颈中央区清扫的意义[D].大连医科大学,外科学,2012,硕士.
[4]吴丹.中国经济发展与水资源利用脱钩态势评价与展望[J].自然资源学报,2014,01:46-54.
[5]孔卫予.高中语文运用合作学习方式的实践研究[D].杭州师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[6]陈田.后发展地区社会管理创新中的政府行为研究[D].华中师范大学,公共管理,2013,硕士.
[7]夏振华.基于CAN总线和Zigbee的粮情监测系统的研究与设计[D].安徽工程大学,检测技术与自动化装置,2012,硕士.
[8]曹瑜旦.基于模糊集与水平集的医学图像自动分割算法研究[D].安徽大学,计算机技术,2014,硕士.
[9]黄炜斌.室内火灾智能联动系统研究[D].华东理工大学,机械电子工程,2014,硕士.
[10]沈贵月.2009年～2012年武汉协和医院鲍曼不动杆菌临床分布特点及耐药性分析[D].华中科技大学,内科学,2013,硕士.
[11]田建平.六种凤仙花属植物的系统学及匍匐凤仙花传粉生物学研究[D].湖南师范大学,植物学,2004,硕士.
[12]王力.新型自动液相微萃取与高效液相色谱联用技术及应用研究[D].华中科技大学,2013.
[13]李庆胜.金诚电子公司发展战略研究[D].大连理工大学,工商管理,2004,硕士.
[14]吕晨.《少年Pi的奇幻漂流》中的“幸存”叙事[D].浙江大学,英语语言文学,2014,硕士.
[15]王姗.XBRL在资诚公司企业内部的应用研究[D].华中科技大学,会计,2013,硕士.
[16]李恺.种植体数目与分布对下颌种植覆盖义齿牙槽骨改建的影响[D].第四军医大学,口腔临床医学,2014,硕士.
[17]冯波,李锦涛,郑为民,张平,丁振华.一种新的RFID标签识别防冲突算法[J].自动化学报,2008,06:632-638.
[18]王雁翔.保护层开采钻式采煤机截齿耐磨性研究[D].中国矿业大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[19]王曦.天津海上搜救的经济投入与社会效益的对比与分析[D].大连海事大学,交通运输工程,2014,硕士.
[20]张泽一.产业政策有效性问题的研究[D].北京交通大学,2010.
[21]杨套军.新一代银行股票交易系统技术研究[D].东南大学,2005.
[22]徐磊婵.GPER蛋白在Ⅱ型子宫内膜癌信号传导通路中的作用[D].河北医科大学,妇产科学,2014,硕士.
[23]束洪春,孙向飞,于继来.粗糙集理论在电力系统中的应用[J].电力系统自动化,2004,03:90-95.
[24]吕伏建.半导体薄膜的制备及其光催化和光电性能研究[D].上海师范大学,环境科学,2014,博士.
[25]周会.基于行业和地域视角的独立董事津贴影响因素实证研究[D].华侨大学,企业管理,2014,硕士.
[26]张育红.从语篇功能角度对中国大学生英语作文连贯的研究[D].华东师范大学,英语语言文学,2004,硕士.
[27]于皓钧.基于本体的隐私保护关键问题研究[D].山东大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[28]李昱.我国矿业权交易方式研究[D].华中科技大学,法律,2013,硕士.
[29]马宏远.攀钢4号高炉WDPF分布式计算机系统[J].冶金自动化,1991,01:13-17+27-61.
[30]沈皓君.初探一般货物买卖违约的风险负担[D].上海社会科学院,民商法学,2012,硕士.
[31]顼志兵.A型行为冠心病患者血浆儿茶酚胺、5-羟色胺测定的临床研究[D].山西医科大学,心血管内科学,2002,硕士.
[32]张明洪.基于Visual C++6.0的平面盘型凸轮机构设计专家系统的开发[D].西安理工大学,机械制造及其自动化,2003,硕士.
[33]朱仲邃.基于数据仓库的OLAP技术及实例研究[J].内蒙古科技与经济,2005,10:93-94.
[34]张景超.微细晶γ-TiAl合金的制备及其性能研究[D].长春工业大学,材料学,2013,硕士.
[35]陈进熹.基于电力载波的可寻址继电器和开关的设计[D].浙江工业大学,机械电子工程,2012,硕士.
[36]梁倩倩.金属橡胶螺旋卷成型工艺及机构研究[D].西安工业大学,车辆工程,2014,硕士.
[37]叶群英.明清（1368-1840）信江流域市镇的历史考察[D].江西师范大学,中国古代史,2004,硕士.
[38]覃莉.CRISP2基因表达、多态性与男性不育相关性的初步研究[D].广西医科大学,妇产科学,2013,硕士.
[39]姬华伟.氮素形态与铜、锌对香蕉枯萎病防治的研究[D].南京农业大学,植物营养学,2012,硕士.
[40]李敏.燕尾藓属（Bryhnia）和异叶藓属（Kindbergia）基于分子和形态证据的分类学修订[D].华东师范大学,植物学,2014,博士.
[41]刘颖晖.诉讼离婚标准研究[D].湖南师范大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[42]贾佳荣.蒙学教材对儿童对外汉语教学的启示[D].鲁东大学,汉语国际教育（专业学位）,2014,硕士.
[43]邵伯余.基于Web的数据仓库应用研究[D].南京理工大学,2002.
[44]王勇.柴沟煤矿不同煤柱条件下的矿压显现规律[D].中国矿业大学（北京）,采矿工程,2011,博士.
[45]王劲龙.论我国税务行政强制[D].湘潭大学,法律,2011,硕士.
[46]孙向海.基于呼叫中心的客户关系管理系统的实现[D].南京航空航天大学,2002.
[47]梁顺.新建车站平行长距离下穿既有隧道安全分析研究[D].北京交通大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[48]蔡波.我国房地产上市公司竞争力分析[D].天津大学,2004.
[49]严静惠.“90后”大学生思想政治教育对策研究[D].黑龙江大学,思想政治教育,2013,硕士.
[50]黎结初.50例慢性淋巴细胞白血病的临床分析[D].广西医科大学,血液内科（专业学位）,2013,硕士.