MSTN RNAI和FSTN过表达基因转移体的构建

【摘要】MSTN(肌抑素,1myostatin),也称生长分化因子8,属于TGF-β超家族,是骨骼肌生长和发育的负调控因子,会抑制骨骼肌的生长和发育。卵泡抑素(follistatin,FSTN)又称为FSH抑制蛋白,是单链糖蛋白。FSTN蛋白可以与MSTN黏合在一起,阻断MSTN的抑制功能,从而促进肌肉生长。敲除或敲减MSTN或过表达FSTN可以促进肌肉发育,有效增加肌肉量。本研究首先构建和筛选出MSTN的高效RNAi干扰载体；然后在筛选出的最佳干扰载体的上游插入核基质结合序列(MAR),构建成含有MAR的干扰载体。通过mRNA和蛋白水平的验证,证实MAR干扰载体显著提高了干扰效率。当将含MAR的干扰载体转染到肌肉卫星细胞后,与肌肉发育相关的基因在敲减的细胞中的表达量显著提高。最后,将外源FSTN基因导入MAR干扰载体,构建成没有选择标志和载体骨架序列、安全的独立基因转移体,即pMAR-U6-shRNA926-CMV-FSTN。该基因转移体可长期稳定降低MSTN基因的表达并增强FSTN基因的表达。利用该基因转移体制备了转基因小鼠,经验证该表达盒可以在个体水平上高效表达。本研究建立了安全有效的新型动物转基因载体系统,对生产安全转基因动物具有重要的实际意义。
【作者】高丽；
【导师】李光鹏；
【作者基本信息】内蒙古大学，动物学，2014，硕士
【关键词】MSTN；RNAi；MAR；肌肉发育；FSTN；基因转移体；

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