食用菌中漆酶基因的克隆及乳酸菌电激转化体系的建立

【摘要】青贮饲料是发展畜牧业的重要物质基础,乳酸菌决定了青贮饲料的质量,随着我国畜牧产业的迅速发展,对青贮饲料的需求量也逐渐增大,提高饲料的利用率是解决饲料不足的关键。漆酶对包裹在纤维素外的木质素具有很强的降解能力,有利于纤维素充分的降解。近年,对于漆酶的降解功能受到越来越多的关注,因此本文以布氏乳杆菌为试验材料,采用生物物理技术引入漆酶基因拟构建新型乳酸菌。以期该菌的代谢产物中既有乳酸又有漆酶,故而既提升了饲料的品质也提高了饲料的利用率。本课题主要结论如下：1、选取多种食用菌为试验材料,依据RB亮蓝变色强度从中挑选三种食用菌,采用ABTS法定量测定三种食用菌的漆酶活性,杏鲍菇的酶活性为324.07U/L,平菇的酶活性为43.98U/L,白灵菇的酶活性为17.36U/L,即漆酶活性由高到底分别为杏鲍菇、平菇、白灵菇。2、根据侧耳科漆酶基因共同保守序列设计引物,采用PCR方法获得了三种典型木腐食用菌(白灵菇、杏鲍菇、平菇)漆酶的基因序列,扩增得到的片段长度均为2606bp(GeneBank注册号分别为KC789845、KC789846、KC789847)通过对基因序列的内含子/外显子分析,得出漆酶编码区的cDNA序列,该基因的开放阅读框由1596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽,预测杏鲍菇、平菇、白灵菇漆酶蛋白分子量分别为56682.0、56692.0、56727.1,等电点偏酸性,pI均为4.56,均含有9个可能的N-糖基化位点(Asn-Xaa-Thr/Ser)。3、利用RT-PCR方法,克隆了杏鲍菇完整Lacc1基因cDNA序列,将其与乳酸菌食品级表达载体pMG36e进行连接,成功构建漆酶乳酸杆菌表达载体重组质粒pMG36e-Lacc1。4、探究影响乳酸杆菌电转化的最适条件,将重组质粒电转化到布氏乳杆菌中,当电场强度达到1.75kV,用SMRS培养基复苏培养1.5h后,得到了较高的电激转化效率。
【作者】薛丹；
【导师】那日；
【作者基本信息】内蒙古大学，生物物理学，2014，硕士
【关键词】食用菌；漆酶基因；布氏乳杆菌；表达载体pMG36e；电激转化；

【参考文献】
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