三黄烧伤灵对烧伤难愈创面铜绿假单胞菌生物膜干预的实验研究

【摘要】目的建立铜绿假单胞菌(Pseudomonasaerugionsa,PA)生物膜体外模型,对比自制外用中药制剂三黄烧伤灵与黄芩作用于PA体外成熟生物膜的研究,为治疗PA引起的难愈创面感染提供治疗依据。方法(1)全自动细菌分析仪鉴定我院烧伤科送检微生物标本为PA,应用阿利新蓝-刚果红染色定性PA生物膜,以聚氯乙烯薄片为载体,LB肉汤为培养基,96孔板培养建立PA生物膜体外模型,分别在培养1d,3d,5d,7d时结晶紫染色生物膜半定量,扫描电镜观察生物膜形态,确定生物膜成熟时间。(2)微量稀释法测定三黄烧伤灵萃取液、黄芩对临床PA的最低抑菌浓度(MIC)值。(3)根据所采用的药物不同,将实验组分为三组,分别为空白对照组(无药品)、对照组(黄芩组)、实验组(三黄烧伤灵组),根据药物MIC值配置不同浓度的药物,作用于PA成熟生物膜,扫描电镜(SEM)从形态学角度观察三黄烧伤灵萃取物、黄芩的作用效果,琼脂平板法生物膜内活菌计数,对比药物作用前后的效果。结果阿利新蓝-刚果红染色,结果表明临床分离的PA,76.67%能形成生物膜；于培养1d,3d,5d,7d时结晶紫染色测得OD值实验菌株分别为：0.41士1.23,0.97+1.44,1.94士1.27,1.86-4-1.15,对照菌株分别为：0.49±1.02,0.63+0.89,0.76-4-1.43,0.79+1.12；电镜扫描显示,培养5d是PA形成生物膜成熟；三黄烧伤灵萃取物对PAL生物膜的MIC为8192μg/ml和单味黄芩的对PA生物膜的MIC为2084gg/ml；对PA成熟生物膜的作用浓度,三黄烧伤灵在2MIC(32768μg/ml),黄芩在4MIC(4096μg/ml),培养液孔清亮,用药前后生物膜内细菌计数有统计学意义。结论(1)PA生物膜的形成在其耐药机制中占有重要作用,且在体外大多能形成生物膜;(2)阿里新蓝-刚果红染色重复性好,敏感性高,操作简便易行,能对细菌是否产生生物膜进行初筛,可以在临床微生物检测中应用：(3)三黄烧伤灵及黄芩对PA成熟生物膜有一定破坏作用,且在本实验中三黄烧伤灵作用效果较黄芩用量小,效果好,三黄烧伤灵可作为治疗烧伤难愈创面PA感染的有效药物。
【作者】闫增强；
【导师】王凌峰；酆波；
【作者基本信息】内蒙古大学，生物工程，2014，硕士
【关键词】三黄烧伤灵；黄芩；铜绿假单胞芮；生物膜；

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