胡麻枯萎病生防菌拮抗物质的筛选和分离纯化研究

【摘要】本论文以从胡麻种植土壤中分离的一株生防细菌SF1作为研究对象,研究了其对胡麻枯萎病病原菌的体外抑菌活性及其有效拮抗物质。首先,对菌株SF1进行菌种鉴定,确定了其系统发育地位。其次,对影响生防菌SFl体外抑菌活性的条件进行了研究。最后,对该菌株产生的活性物质进行了筛选和分离纯化,确定了部分有效拮抗物质。本文的主要研究内容和结果如下：1、通过平板涂布实验,对菌株SF1的体外抑菌活性进行测定,发现其对尖孢镰刀菌胡麻专化型真菌具有明显的抑菌活性,抑菌率达58.99±0.01%。2、结合形态学、生理生化及分子生物学特征对菌株SF1进行菌种鉴定,结果表明其属于萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus),为生物安全四类微生物,即使用安全,可以作为生物防治菌种。3、分别测定种龄、发酵时间、保存温度和pH对生防菌SF1抑菌效果的影响,结果发现：培养条件为：种龄8h,29℃、150r/min发酵24h；发酵液在4-44℃储存,pH为7.0～11.0时,对发酵液的抑菌效果没有显著影响。4、生防菌SF1的有效拮抗物质是胞外分泌物,主要为挥发性物质和蛋白质类物质。采用活性炭吸附收集挥发性物质,GC/MS测定挥发性物质组成,可检测到其产生的挥发性物质包括有酮类、酸类、醚类、胺类、烯烃类、烷烃类等24种,其中,丙酸、丁酸、戊酸、硬脂酸、苯酚5种物质有一定的生物活性。采用硫酸铵盐析、透析、凝胶过滤法分离纯化蛋白质类物质,得到两个达电泳纯的有效物质G75-1和G75-2,二者的比抑菌率分别达323.42%/mg和168.18%/mg,纯化倍数分别达26.65和13.86倍,蛋白含量回收率分别达0.92%和0.76%。通过SDS-PAGE分析,测得G75-1分子量约为40.5KDa,G75-2分子量约为19.5KDa。
【作者】李琳；
【导师】苑琳；
【作者基本信息】内蒙古大学，生物工程，2014，硕士
【关键词】胡麻枯萎病；生物防治；萎缩芽孢杆菌；拮抗物质；

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