自制中药破坏大肠杆菌生物膜提高头孢他啶作用的实验研究

【摘要】目的1.建立耐药大肠杆菌体外生物膜模型；2.探讨黄芩、自制中药分别联合头孢他啶对形成成熟生物膜的耐药大肠杆菌的作用情况,为临床用药提供实验依据。方法1.全自动细菌分析仪鉴定为大肠杆菌,K-B纸片扩散法测定大肠杆菌药敏情况,应用阿利新蓝-刚果红染色及刚果红平板定性大肠杆菌生物膜,以聚氯乙烯为载体,L-B肉汤96孔板培养建立大肠杆菌生物膜体外模型；2.大肠杆菌培养24h、48h、72h、5d时,应用结晶紫生物膜半定量,扫描电镜观察载体表面大肠杆菌生物膜的形成情况,以确定生物膜成熟的时间；3.应用微量稀释法检测黄芩、自制中药、头孢他啶对临床大肠杆菌及标准菌株的MIC；根据MIC值通过倍比关系配制成不同浓度药物,棋盘法加入含有成熟生物膜的大肠杆菌96孔板中药物作用24h后,通过生物膜内活菌计数观察对成熟生物膜的大肠杆菌的作用效果,以黄芩做对照。结果1.在DH-360型电热恒温培养箱条件下,L-B肉汤培养72h时耐药大肠杆菌可以形成成熟的生物膜；2.自制中药及黄芩对实验菌株的MIC值是32768ug/ml,对标准大肠杆菌菌株的MIC分别是8192ug/ml和16384ug/ml,头孢他啶对实验及标准大肠杆菌菌株的MIC分别是32ug/ml、4ug/ml,黄芩联合头孢他啶作用于形成成熟生物膜的大肠杆菌,黄芩有效浓度最低为16384ug/ml,头孢他啶有效浓度最低为4ug/ml,自制中药联合头孢他啶作用于形成成熟生物膜的大肠杆菌,自制中药最低有效浓度为8192ug/ml,头孢他啶的有效浓度为4ug/ml。结论1.大肠杆菌的生物膜在大肠杆菌的耐药机制中占重要作用；2.阿里新蓝-刚果红染色重复性好,敏感性高,操作简便易行,能对细菌是否产生生物膜进行初筛,可以在临床微生物检测中应用；3.大肠杆菌在本实验条件下培养72h时可形成成熟的生物膜；4.自制中药可以破坏大肠杆菌生物膜,抑制大肠杆菌的生长,通过与头孢他啶的联合用药,能增强对细菌的杀菌效果并降低各自的用药剂量。
【作者】牛俊瑞；
【导师】王凌峰；酆波；
【作者基本信息】内蒙古大学，生物工程，2014，硕士
【关键词】大肠杆菌；生物膜；中药；头孢他啶；敏感性；

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