人溶血磷脂酸受体3基因的克隆、表达载体构建及其功能研究

【摘要】目的：克隆人质子感知受体LPAR3基因、构建LPAR3基因的表达载体并瞬时转染HO-8910细胞,检测LPAR3的表达及研究其对细胞迁移的作用。方法：设计一对针对LPA3基因的引物,从含有人LPAR3序列的质粒中克隆不含终止密码子的LPAR3基因并亚克隆至pMD19-T载体。将鉴定出的阳性质粒和表达载体pIRES2-EGFP用XhoI酶和BamHI酶双酶切回收后连接获得阳性重组质粒pIRES2-EGFP-LPA3,并测序鉴定；重组载体以LipofectamineLTX&PluxReagent介导转染人肾上皮细胞(293T细胞)。用RealtimePCR去检测外源基因在293T细胞中的表达。随后将其转染至卵巢癌细胞HO-8910中,用RealtimePCI法检测LPAR3在野生型细胞与转基因细胞中LPAR3基因表达量,同时检测在LPA刺激下的两种细胞的增殖情况。结果：测序和酶切证实了克隆到：LPAR3基因并获得了pIRES2-EGFP-LPAR3表达载体；荧光显微镜照相与RealtimePCR都证实了LPAR3基因在293T细胞当中的高表达；同时定量检测还发现LPAR3基因在人卵巢癌细胞(HO-8910细胞)中高表达。LPA梯度刺激HO-8910细胞后发现,LPA可以抑制细胞的增殖效应,同时LPA刺激LPAR3转基因细胞相比未转染细胞增殖能力下降。结论：基因克隆构建得到]LPAR3基因和表达载体pIRES2-EGFP-LPAR3,转染细胞检测到LPAR3在细胞内高表达,同时还发现LPA刺激可以抑制HO-8910细胞的增殖,且转染LPAR3基因后LPA抑制细胞增殖的作用增强。
【作者】木其日；
【导师】阿拉坦高勒；
【作者基本信息】内蒙古大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】LPA3受体；HO-8910细胞；细胞增殖；

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