重组灵芝免疫调节蛋白的抗肿瘤作用研究

【摘要】喉癌（Laryngocarcinoma）是头颈恶性肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一，由于手术切除治疗会损害喉部，影响生活质量；喉癌细胞对辐射的灵敏度差异性较大,放射治疗效果依旧不佳。脑胶质瘤（Glioma）是最常见的颅内恶性肿瘤，由于其侵润性生长，与脑组织无明显分界，难以彻底手术切除，而放射治疗会对脑功能存在不良影响。黑色素瘤（melanoma），是异常黑色素细胞过度增生引发的常见皮肤肿瘤，早期患者多数可通过手术治愈，但进展期患者中位生存期短、生存率低，且黑色素瘤对放疗不敏感，被认为是一种抗辐射的恶性肿瘤。因此药物治疗已逐渐成为喉癌、脑胶质瘤以及黑色素瘤的重要治疗方法，但是由于目前的化疗药的治疗效果有限，而且存在严重的毒副作用，没有显著提高患者的生存率，所以有必要研究出疗效高、毒性低、乃至天然的抗肿瘤药物对喉癌、脑胶质瘤及黑色素瘤进行治疗。灵芝（Ganodermalucidum）是一种药用真菌，作为中药材已有数千年的药用历史，据报道，灵芝有免疫调节以及抗肿瘤作用。灵芝中的活性成分之一灵芝免疫调节蛋白（LZ-8）是从赤灵芝中提取的真菌免疫调节蛋白，本论文使用的重组灵芝免疫调节蛋白（RecombinantGanodermalucidumimmunoregulatoryprotein，rLZ-8）是重新设计编码并全合成LZ-8基因，并通过毕赤酵母表达系统重组表达并纯化获得的蛋白样品，以往研究表明，rLZ-8也具有一定的抗肿瘤活性，例如，rLZ-8可有效杀伤人早幼粒白血病细胞NB4，人肺腺癌细胞A549，人胃癌细胞SGC7901等肿瘤细胞株，但关于rLZ-8对喉癌及脑胶质瘤的治疗作用尚未见报道。本论文是研究是从rLZ-8对肿瘤细胞的体外抑瘤作用和体内抑瘤作用两方面展开的。体外方面采用MTT法检测不同浓度的rLZ-8对Hep-2细胞、C6脑胶质瘤细胞及A375黑色素瘤细胞的杀伤作用。实验结果显示，rLZ-8对以上三种肿瘤细胞都有明显的杀伤作用，其中rLZ-8对Hep-2细胞及A375细胞的杀伤作用呈时间-剂量依赖性，rLZ-8对C6细胞的杀伤作用呈剂量依赖性。通过采用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测rLZ-8对Hep-2细胞、C6细胞及A375细胞的诱导凋亡作用，结果显示，rLZ-8对Hep-2喉癌细胞没有明显诱导凋亡作用，对C6脑胶质瘤细胞诱导凋亡作用显著，且呈剂量依赖性，对A375黑色素瘤细胞有一定的促凋亡作用。体内部分采用皮下接种Hep-2细胞、C6细胞及A375细胞，建立喉癌裸鼠模型、脑胶质瘤裸鼠模型及黑色素瘤裸鼠模型，接种细胞数均为5106个/只。于接种后第二天开始分组给药，给药期间每天测量裸鼠体重，每周测量两次肿瘤体积，给药结束后处死动物，称量肿瘤组织重量。实验结果显示：rLZ-8能降低裸鼠喉癌移植瘤的肿瘤体积及瘤重，但与模型组相比没有显著的抑瘤作用；rLZ-8对脑胶质瘤的治疗作用明显，能显著抑制肿瘤生长，其肿瘤体积和瘤重结果与模型组相比均有显著性差异（P＜0.01）；rLZ-8仅高剂量组对黑色素瘤具有明显的抑瘤作用（P＜0.01）。对剥离出的肿瘤组织进行HE染色，结果显示：rLZ-8能够引起脑胶质瘤及喉癌肿瘤组织的大片坏死，其中脑胶质瘤组织中的坏死区较为明显。以上实验表明，rLZ-8对喉癌抑瘤效果不佳，对脑胶质瘤及黑色素瘤有明显的治疗作用。
【作者】宋俐萍；
【导师】裴瑾；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】重组灵芝免疫调节蛋白；喉癌；脑胶质瘤；黑色素瘤；抑瘤作用；

【参考文献】
[1]张晶星.基于《伤寒论》的小阴旦汤探讨[D].浙江中医药大学,中医临床基础,2013,硕士.
[2]谢娇.不确定时滞广义双线性系统的容错控制[D].东北大学,系统理论,2011,硕士.
[3]张可迪.嵌入式操作系统运行时验证技术研究[D].国防科学技术大学,软件工程,2012,硕士.
[4]李彩霞.几类半群的模糊理想的若干研究[D].兰州理工大学,基础数学,2014,硕士.
[5]李晓光.我国商业银行客户经理制探析[D].吉林大学,国民经济学,2004,硕士.
[6]郭小萌.北京西山岩溶水数值模拟及其应急开采能力评价[D].首都师范大学,地图学与地理信息系统,2014,硕士.
[7]于红丞.装配车间无线传感器网络应用关键技术研究[D].华中科技大学,机械电子工程,2013,硕士.
[8]曾莉,胡广大.带输入延时的连续时间系统的离散化(英文)[J].自动化学报,2010,10:1426-1431.
[9]陈希.乙肝后肝硬化中医证素规律的文献及临床研究[D].成都中医药大学,中医诊断学,2012,硕士.
[10]黄凤.部分呼出气一氧化氮检测在肺炎支原体肺炎中的意义[D].苏州大学,儿科学（专业学位）,2013,硕士.
[11]彭小舟.试论普通中学教师队伍素质的提高[D].江西师范大学,教育管理,2003,硕士.
[12]王增收.幼儿园园长视角中的学前教育小学化问题研究[D].华东师范大学,学前教育学,2013,硕士.
[13]李斯.钓鱼岛争端中美国政府的立场及其变化研究[D].吉林大学,国际政治,2014,硕士.
[14]成琤.教师功能性言语对对外汉语课堂教学互动促进作用的研究[D].东北师范大学,汉语国际教育,2012,硕士.
[15]李燕.墨子义利思想研究及其现代价值[D].杭州师范大学,中国哲学,2007,硕士.
[16]雒焕华.外源β-胡萝卜素基因表达对酿酒酵母甲羟戊酸途径中关键酶的影响[D].北京化工大学,微生物与生化药学,2013,硕士.
[17]杨妮娜.层状双氢氧化物对不饱和烃类材料的阻燃作用研究[D].首都经济贸易大学,安全工程（专业学位）,2014,硕士.
[18]王昀.硼替佐米为基础的联合方案治疗多发性骨髓瘤患者的临床研究[D].郑州大学,血液内科（专业学位）,2013,硕士.
[19]姚旭丽.农户对农业保险购买支付意愿的影响因素研究[D].浙江工商大学,保险（专业学位）,2014,硕士.
[20]澈力木格.审计委员会特征与会计师事务所选择的经验研究[D].吉林大学,会计,2014,硕士.
[21]王添翼.城市小学生校外学习方式现状及引导策略研究[D].扬州大学,教育学原理,2012,硕士.
[22]岳静.贸易便利化对我国与东盟成员国贸易的影响[D].南开大学,国际贸易学,2010,硕士.
[23]徐余法.粗糙集理论及应用[J].上海电机学院学报,2005,02:39-43.
[24]刘志辉.基于J2EE的家装管理系统的设计与实现[D].山东大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[25]虞飞.民营企业劳动关系和谐管理研究[D].苏州大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[26]王菁晶.中国房地产价格过快上涨及调控政策效应研究[D].首都经济贸易大学,产业经济学,2013,硕士.
[27]李银.LNG槽车智能终端的设计与实现[D].华中科技大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[28]吴阳.论我国非金属矿资源开发的税费法律调整[D].吉林财经大学,经济法学,2014,硕士.
[29]李闪闪.支持汉语语句深层分析的本体研究[D].首都师范大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[30]粟怡.中国企业海外并购的财务风险研究[D].长安大学,会计学,2013,硕士.
[31]唐明宇.单井循环地下换热系统的储能实验研究[D].哈尔滨工业大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2013,硕士.
[32]李文静.Johnson结合方案上的Bannai维数问题[D].天津职业技术师范大学,应用数学,2013,硕士.
[33]杨文红.旅行社网络化经营体系构建研究[D].青岛大学,旅游管理,2004,硕士.
[34]谢振东,谢胜利,刘永清.滞后关联分布参数系统的分散变结构控制[J].自动化学报,1999,06:805-810.
[35]王欣.窄带高速数据传输系统研究及仿真[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[36]尹铁.大口径热煨弯管坡口机浮动切削原理及动力学性能研究[D].河北工业大学,机械工程,2013,硕士.
[37]顾红.一类描述PEPA模型的反应扩散问题[D].扬州大学,应用数学,2012,硕士.
[38]张霞.基于LabVIEW的油田环境数据采集软件设计[D].内蒙古大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[39]GengJing.Exploring Translation Ethics of Scholar Translators[D].西安外国语大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[40]肖笑荣.MCSP特异性单克隆抗体的研制及其性质和功能的初步研究[D].广东药学院,病原生物学,2013,硕士.
[41]党文峰.基于绿色物流的木塑托盘应用研究[D].中南林业科技大学,森林工程,2014,硕士.
[42]齐凯欣.关于我国票据公示催告程序的法律思考[D].河北经贸大学,法律,2014,硕士.
[43]李鲁宁.EGR对二级增压重型柴油机性能和排放的影响[D].吉林大学,动力工程,2014,硕士.
[44]熊苹.走进现代学徒制[D].华东师范大学,职业技术教育学,2004,硕士.
[45]田涛涛.羌归膝舒丸治疗膝关节骨性关节炎（寒凝血瘀型）的临床观察[D].湖南中医药大学,中医骨伤科学（专业学位）,2013,硕士.
[46]宁俊超.基于ansys大跨度张弦梁结构预应力模拟研究[D].西南交通大学,结构工程,2013,硕士.
[47]谢轶群.车用FlexRay网络应用原型系统的研究与实现[D].湖南大学,计算机科学与技术,2011,硕士.
[48]胡姗姗.基于波长路由的LEO卫星光网络路由算法研究[D].哈尔滨工业大学,物理电子学,2013,硕士.
[49]王世文.陕北某煤矿矿坑涌水量预测[D].石家庄经济学院,地质工程,2013,硕士.
[50]李志,何平.微型计算机在锻压行业中的应用前景与对策[J].机械与电子.1986(03)