塞来昔布协同TRAIL在甲状腺髓样癌TT细胞中的凋亡诱导作用及相关机制

【摘要】背景：甲状腺髓样癌（medullarythyroidcancer，MTC）是一种起源于甲状腺滤泡旁细胞的恶性神经内分泌肿瘤。在所有甲状腺癌中MTC发生率可高达可达8%。然而由甲状腺髓样癌所致死亡的比率在所有甲状腺癌所致死亡中约占13.4%。目前甲状腺髓样癌的有效治疗方式在于早期诊断后的手术治疗。由于甲状腺髓样癌具有易早期转移的特性，且辅助性放射碘治疗对MTC作用甚微，手术治疗并不能为大部分MTC患者争取良好的生存率，远处转移成为MTC致死的主要原因。因此需要探寻新的治疗方法，改善患者症状，并提高预后。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand，TRAIL）能够选择性的诱导肿瘤细胞凋亡，对正常细胞无杀伤作用，为肿瘤治疗提供了广阔的前景。但随着对其研究的深入，发现多数癌细胞对TRAIL具有一定的抵抗性。克服TRAIL抵抗性成为其在癌症治疗中的重要课题。近年来研究表明，环氧化酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）在甲状腺髓样癌中异常高表达，对甲状腺髓样癌的发生、发展具有重要作用。COX-2抑制剂塞来昔布与其他化疗药物合用能够改善肿瘤细胞对化疗药物的抵抗性，增强肿瘤细胞的凋亡，因此在甲状腺髓样癌中探讨塞来昔布对TRAIL增敏作用具有重要意义。目的：观察塞来昔布对TRAIL诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡的促进作用并初步探讨其机制。方法：MTT法检测TRAIL、塞来昔布及联合用药对TT细胞增殖的抑制作用。PI单染法检测药物对细胞周期的阻滞作用。DNAladder检测细胞凋亡的发生，Hochest33258染色检测药物诱导TT凋亡的形态学改变，AnnexinV/PI双染流式检测塞来昔布对TRAIL诱导TT细胞凋亡的促进作用。Real-timePCR检测DR4、DR5、c-FLIP基因的表达水平。Westernblot检测细胞cyclingA、Cdk2、DR4、DR5、c-FLIP及caspase-8蛋白的表达水平。结果：1）、低浓度TRAIL对TT细胞增殖抑制作用很弱，当其浓度高达2000ng/ml时，对TT细胞72小时增殖抑制率为15.77±1.42%，TT细胞对TRAIL不敏感；celecoxib对TT细胞的抑制成时间浓度依赖性。而50uMcelecoxib与1000ng/mlTRAIL联合用药对TT细胞的24、48h增值抑制率分别为为(27.3±1.89%、47.54±1.34%)明显高于单用celecoxib（13.40±2.40%、24.49±1.57%）及TRAIL（2.15±1.12%、7.75±3.84%）对TT细胞的抑制率之和，P<0.01，差异有统计学意义。2）、celecoxib组及联合用药组处理TT细胞48h，其G0/G1期细胞分布比率为(82.82±0.38%)及(81.76±0.64%)明显高于control组(72.35±0.51%)和单用TRAIL组(72.08±0.74%)，P<0.05，差异有统计学意义。细胞周期相关蛋白cdk2及cyclingA在celecoxib组及联合用药组表达明显降低，而在control组及TRAIL组未见明显改变。3）、联合用药组DNA片段化程度明显高于TRAIL组及celecoxib组；且联合用药组细胞核固缩及碎裂程度远高于TRAIL组及celecoxib组。合用药组细胞凋亡率为31.92±1.35%高于单用TRAIL(6.32±0.83%)及celecoxib(15.29±2.15%)之和，P<0.01，差异有统计学意义。4）、联合用药组caspase-8裂解活化程度明显高于TRAIL及celecoxib组；联合用药组及celecoxib组DR5的mRNA相对表达水平明面高于TRAIL及control组(P<0.05)，与DR5蛋白表达相一致，而各组DR4表达水平未见明显差异。celecoxib组及联合组c-FLIPmRNA的表达与control组及TRAIL组比较明显下调(P>0.05)，这与c-FLIP蛋白表达改变相一致。而celecoxib处理组及联合应用组均明显可见RIP表达的下调。结论：1、甲状腺髓样癌TT细胞对TRAIL不敏感，TRAIL联合塞来昔布能够逆转TT细胞对TRAIL的抵抗性。2、塞来昔布通过降解cyclingA及Cdk2阻滞TT细胞于G0/G1期，促进TRAIL对TT细胞的杀伤作用。3、塞来昔布可以上调DR5、下调c-FLIP的表达，促进caspase-8的活化，增强TRAIL对TT细胞的凋亡诱导作用。
【作者】郑桂彬；
【导师】孟宪瑛；
【作者基本信息】吉林大学，外科学，2014，硕士
【关键词】TRAIL；塞来昔布；甲状腺髓样癌；凋亡；DR5；

【参考文献】
[1]崔黎黎,刘杰,张勇.基于单网络ADP的一类未知非线性系统的近似最优控制[J].控制与决策,2013,09:1423-1426+1430.
[2]郁川.鸡β2-微球蛋白在马立克氏病毒感染与致肿瘤中的作用研究[D].扬州大学,预防兽医学,2013,博士.
[3]朝勒格尔.鄂温克民间故事动画表现的可行性研究[D].内蒙古大学,美术学,2014,硕士.
[4]黎建华.郴州市黑斑蛙裂头蚴感染情况调查及pnad5和prrnS基因分子鉴定[D].湖南农业大学,预防兽医,2012,硕士.
[5]程永刚,许用梁.ASON标准的最新进展介绍[J].电信网技术.2005(03)
[6]姜薇.丙酮丁醇梭菌对单糖和混合糖的利用[D].浙江大学,生物化工,2011,硕士.
[7]耿宝权.大型体育场馆全寿命期管理研究[D].北京交通大学,管理科学与工程,2014,博士.
[8]王丽敏.水草收割工程对乌梁素海氮元素转移过程的研究[D].内蒙古农业大学,农业机械化工程,2004,硕士.
[9]罗钢,林健.现代信息技术条件下信息和信息系统再认识[J].系统工程学报,2004,06:661-664.
[10]尹波.基于客户个性化信息的客户终生价值模型及应用研究[D].大连理工大学,企业管理,2013,硕士.
[11]尹晓娟.糖多孢红霉菌TetR家族转录调控子SACE_0012对形态分化的作用[D].安徽大学,微生物学,2013,硕士.
[12]谌霞.仿真系统辅助中学化学实验教学的研究[D].温州大学,课程与教学论,2012,硕士.
[13]佟松贞.基于物料搬运系统认知自动化水平的制造柔性研究[D].清华大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[14]徐新正,孙建辉,袁巧玲,单晓杭.无摩擦气缸活塞的结构变形分析[J].轻工机械,2014,02:87-90+94.
[15]胡莹莹.非转座子载体介导的转基因家蚕的研究[D].苏州大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[16]王景纲.开发高水平通用部件促进组合机床技术发展[J].组合机床与自动化加工技术.1987(07)
[17]韩文英.超声造影与增强CT在肾肿瘤鉴别诊断中的对比研究[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[18]刘亚丽.农村客运系统发展规划研究[D].长安大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[19]包佶.程序性违法发回重审制度研究[D].湘潭大学,诉讼法学,2012,硕士.
[20]吴勤堂.客户关系管理的技术运作平台及其互馈模型[J].湖北经济学院学报,2004,02:47-51.
[21]王小龙.低温退火工艺让石墨烯走向商用[N].科技日报,2013-12-19002.
[22]关磊.电弧放电法制备石墨烯[A].中国化学会.中国化学会第28届学术年会第8分会场摘要集[C].中国化学会:,2012:1.
[23]刘霞.博尔纳病毒感染人少突胶质细胞的蛋白质组学和乙酰化修饰组学研究[D].重庆医科大学,神经病学,2014,博士.
[24]刘春波.社会保障水平区域差异评价与实证研究[D].山东财经大学,社会保障,2012,硕士.
[25]陈扬.基于反思性教学理论下的大学英语新手教师专业发展的研究[D].沈阳师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[26]庄婷婷.从水信仰看日本的原始文化[D].上海外国语大学,日语语言文学,2013,硕士.
[27]高婷婷.基于EVA的银行业竞争力评价研究[D].西安石油大学,企业管理,2012,硕士.
[28]徐波.论我国网络隐私权的民法保护[D].首都经济贸易大学,民商法学,2013,硕士.
[29]陈杰峰.我国市场经济条件下社会中介组织的建设与发展研究[D].华中师范大学,行政管理,2003,硕士.
[30]刘博通.驾驶员与过街行人非合作动态博弈模型研究[D].哈尔滨工业大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[31]郝力.新起点·新策略·新应用——数字城市的发展之路[J].中国计算机用户,2001,25:29-31+33-36.
[32]陈宇.高压高频响数字溢流阀设计及其特性研究[D].重庆大学,机械电子工程,2014,硕士.
[33]范晓丹.宽禁带微波光子晶体及其在微带天线中的研究与应用[D].吉林大学,电磁场与微波技术,2014,硕士.
[34]刘利.腹腔镜卵巢打孔和达英-35治疗多囊卵巢综合征后妊娠效果评价[D].苏州大学,组织学与胚胎学,2012,硕士.
[35]董丽艳.吴冠中抽象绘画的东方韵味[D].山西师范大学,美术学,2014,硕士.
[36]梁为龙.建筑工程评标办法研究[D].北京化工大学,项目管理（专业学位）,2013,硕士.
[37]王天成,魏新江.不确定奇异时滞系统的时滞相关H_∞控制[J].控制与决策,2006,11:1307-1311.
[38]何俊和.圆度/圆柱度仪用高精度差动电感传感器若干问题研究[D].哈尔滨工业大学,仪器科学与技术,2014,硕士.
[39]闫丹.PBL在高职《计算机基础》实训中的应用研究[D].山西师范大学,教育技术学,2014,硕士.
[40]肖一爽.南京国民政府时期商标法制研究[D].西南政法大学,法律史,2012,硕士.
[41]鲁金直.异构仿真系统联合仿真技术研究及在航空领域的应用[D].华中科技大学,机械工程,2013,硕士.
[42]刘健.沾益县植烟土壤有效态微量元素空间变异特征研究[D].湖南农业大学,作物学,2012,硕士.
[43]张雪松.电弧喷涂—轧制法制备Al_2O_3/Al基—碳钢复合板的实验研究[D].华北电力大学（北京）,热能工程,2003,硕士.
[44]吴龙吟.网络能力对企业社会资本的影响研究[D].山东财经大学,企业管理,2013,硕士.
[45]王殿科.用光弹法研究有偏心圆孔构件的应力变化规律[J].一重技术.1994(01)
[46]矫威.不同改良剂对作物生长发育及酸性土壤理化性状的影响[D].华中农业大学,植物营养学,2014,硕士.
[47]杨喜荣.深海水下作业型机械手控制系统研究[D].浙江大学,2006.
[48]马洋.口腔外科突发医疗紧急事件的原因调查与预防[D].第四军医大学,口腔临床医学,2014,硕士.
[49]郑晶.语境理论在高中英语词汇教学中的应用研究[D].贵州师范大学,学科教学（专业学位）,2014,硕士.
[50]李如松.新型刀具材料与切削工艺的变革[J].组合机床与自动化加工技术.1992(02)