酸性丝氨酸蛋白酶抗白血病细胞作用机制的研究

【摘要】目的：酸性丝氨酸蛋白酶（AcidicSerineProteasefromNeanthesjaponica,ASPNJ）是本实验室从中国北方沿海海洋生物沙蚕体内提纯得到的一种蛋白酶，因其对纤维蛋白有很强的溶解作用，曾命名为沙蚕纤溶酶，现命名为酸性丝氨酸蛋白酶。前期实验研究结果表明，酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ对急性髓细胞白血病NB4细胞和慢性髓性粒细胞白血病K562细胞具有诱导凋亡、抑制细胞增殖，促进化疗药物敏感性等作用。本课题从膜蛋白质组学方面研究ASPNJ对K562细胞和NB4细胞的作用机制，为研究白血病与治疗提供新的思路。方法：ASPNJ（16μg/mL）分别处理K562细胞和NB4细胞，提取细胞膜蛋白进行双向电泳；利用Image-master2DPlatinum7.0软件进行凝胶图像分析，获取对照组与实验组差异蛋白质点，选取差异明显的蛋白质点进行质谱检测，分析鉴定出差异蛋白；进一步选取RanBP1和14-3-3theta两种蛋白进行WesternBlot和RT-PCR检测。结果：K562和NB4细胞膜蛋白凝胶得到数量较多的斑点，蛋白质点分散较好，凝胶背景清晰干净；Image-master2DPlatinum7.0软件分析显示对照组与实验组的匹配率达80%，存在Ratio≥2.0的差异蛋白点；经过质谱分析得到差异蛋白质点的具体信息，其中包括许多参与细胞增殖、分裂、分子伴侣、信号转导、ATP的合成与转运等相关蛋白质。差异蛋白质点中RanBP1与14-3-3theta这两种蛋白质在两种细胞药物处理组表达均明显减少。RanBP1参与细胞核内外物质运输及纺锤体形成等功能，而14-3-3theta蛋白质可与细胞信号转导途径中的原癌基因表达产物相互作用，并具有其他多种调节功能。新近研究表明这两种蛋白质分别都与细胞的抗凋亡作用有关，而这两种蛋白在白血病方面的研究报道还很少。进一步WesternBlot检测表明RanBP1和14-3-3theta两种蛋白在两种细胞的对照组与实验组中的表达量变化与2D凝胶电泳的分析结果一致；而RT-PCR结果显示这两种蛋白在mRNA水平的变化差异并不明显。结论：酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ对慢性髓性粒细胞白血病K562细胞和急性髓细胞白血病NB4细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用可能包含与RanBP1和14-3-3theta两种蛋白表达减少的相关机制。此实验研究结果为研究白血病的治疗机制开创新的方向，也为寻找白血病治疗药物的新靶标提供理论依据。
【作者】姜雪；
【导师】刘剑凯；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】酸性丝氨酸蛋白酶；双向电泳；NB4和K562细胞；白血病治疗；RanBP1和14-3-3theta蛋白；

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