LPS-TLR4通路在慢性酒精摄入大鼠肝纤维化发生的作用

【摘要】背景和目的：在全球范围内，酒精性肝病是导致疾病及死亡的一个重要原因。其病理类型主要包括脂肪肝、肝脏炎症及坏死、进展性肝纤维化，甚至发展为原发性肝细胞癌。虽然现在公认持续性饮酒可导致酒精性肝病，但并不是所有的酗酒者均进展为临床症状明显的肝损伤。其他因素，例如性别、遗传和环境因素在酒精性肝病发生中也起了重要作用。本项研究主要检测内毒素血症在慢性酒精摄入大鼠模型中触发肝脏纤维化的作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为酒精1组、酒精2组、对照1组、对照2组共四组，同时喂养等热量的Lieber-Decarli配方的对照饲料和酒精饲料，1组喂养至8周，2组喂养至10周。采用光度法检测大鼠门静脉血浆LPS浓度。采用原位杂交方法检测大鼠肝脏组织中的TLR4mRNA和TGF-β1mRNA。针对大鼠肝脏组织连续切片，采用免疫组织化学染色检测FSP-1和Vimentin以确定HSC，检测F4/80确认Kupffer细胞。应用计算机图像分析系统检测FSP-1阳性HSC和TLR4mRNA阳性细胞的积分光密度值。采用Westernblot检测大鼠肝脏组织中I型胶原蛋白和α-平滑肌动蛋白。采用RT-PCR法检测IL-1,IL-6,TNF-αandTGF-β1mRNA。采用HE染色和Masson三色染色法评估肝脏的组织学特点。结果：Masson三色染色法显示，和正常组大鼠相比，酒精摄入10周末大鼠出现不同程度的中央静脉周围肝血窦周边纤维化，和Westernblot检测的CollagenI蛋白表达相一致。免疫组化染色显示在酒精摄入10周末大鼠肝脏组织有大量HSC和部分Kupffer细胞激活，而正常组肝脏仅有少量HSC表达。和10周末正常组大鼠相比，10周末酒精组大鼠门静脉血浆内毒素浓度明显增加，然而，8周末酒精组大鼠门静脉血浆内毒素水平未见升高，提示饮酒时间越长，对肠道通透性影响越大。原位杂交显示：酒精摄入10周末大鼠肝脏组织中大量肝细胞，部分HSC和少数Kupffer细胞表达TLR4mRNA，而10周末正常组大鼠或8周末酒精摄入大鼠仅见中央静脉周边内皮细胞或数个肝细胞表达TLR4mRNA。双变量相关分析结果显示：10周末酒精组肝脏TLR4mRNA表达强度与门静脉血浆LPS水平呈正相关(r=0.856;p<0.05)。而且酒精喂养10周末大鼠肝脏的炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α及纤维源性因子TGF-β1基因转录水平较同期对照组增加。结论：慢性酒精摄入可引起大鼠门静脉血浆LPS浓度明显升高，激活肝脏中HSC和Kupffer细胞上的TLR4信号通路，释放炎性因子和纤维源性因子TGF-β1，协同作用于HSC，使其活化，进一步介导肝脏纤维化。
【作者】田珍珍；
【导师】高润平；
【作者基本信息】吉林大学，临床医学，2014，硕士
【关键词】酒精性肝病；脂多糖；肝脏星状细胞；转化生长因子β1；

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