FADD基因对牛卵泡颗粒细胞凋亡诱导作用研究

【摘要】近些年来，我国的肉牛业发展迅速。肉牛繁殖性能的好坏，与其经济效益有着密切的关系。因此，对与肉牛繁殖性能相关的基因及蛋白进行研究是必要的。Fas相关死亡结构域蛋白结构（Fasassociatedproteinwithdeathdomain，FADD），是从酵母双杂交系统中克隆出来的，和Fas分子胞浆通过DD结合，诱导Fas/FasL相关途径进而诱导细胞发生凋亡。FADD在相关的细胞凋亡过程中具有重要的作用，因此也被认为是一个凋亡分子。FADD在生物细胞中能够起到信号转导的蛋白功能，并在细胞凋亡、胚胎发育以及炎症反应过程中发挥至关重要的生物学活性。尽管国内外研究学者对FADD的研究进一步加深，但是关于牛FADD基因的相关研究报道并不多，因此，牛FADD基因能否作为肉牛肉质和酮体性状及种牛繁殖育种性状进行遗传标记需要进一步的研究探讨。RNAi技术是指利用体外合成的短双链RNA抑制细胞内特定基因表达的技术，是转录后基因沉默的一种研究基因功能的有力工具。RNAi的发现具有划时代的意义，不仅深入的揭示了细胞内基因沉默机制，而且还是后基因组时代基因功能分析的有力工具，极大的促进了人类揭示生命奥秘的进程。越来越多的研究人员开始采用RNAi技术来研究生物体的基因表达。因此，本研究以FADD基因为研究对象，从本地黄牛的卵巢中分离培养了卵泡颗粒细胞作为研究材料，构建了FADD基因的RNAi载体及作为对照研究的过表达载体，并转染卵泡颗粒细胞。分别利用实时荧光定量PCR技术及westernblot技术从mRNA水平及蛋白水平检测FADD基因表达量的变化，利用流式细胞仪结合细胞凋亡检测试剂盒对FADD基因干扰及过表达后细胞凋亡的变化进行检测，实验结果证实了FADD基因过表达促进颗粒细胞凋亡，而细胞被转染FADDRNAi载体后会抑制细胞凋亡，进一步说明FADD基因的表达对卵巢颗粒细胞凋亡诱导作用的影响，为肉牛繁殖性能的改善奠定理论基础。
【作者】赵茂鑫；
【导师】赵志辉；
【作者基本信息】吉林大学，动物遗传育种与繁殖，2014，硕士
【关键词】FADD基因；卵泡颗粒细胞；细胞凋亡；繁殖性能；

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