抗CD20单克隆抗体及IL-10基因联合免疫治疗对胰岛β细胞保护作用及机制研究

【摘要】目的观察抗CD20单克隆抗体(Anti-CD20)及腺病毒介导的鼠白细胞介素10(Adenovirusvector-mediatedmurineinterleukin,Ad-mIL-10)联合干预对未发病非肥胖型糖尿病(Nonobesediabetic,NOD)小鼠胰岛炎、胰岛β细胞凋亡的影响和胰岛β细胞的预防保护作用。方法3～5周龄未发病雌性NOD小鼠24只,随机分为①Anti-CD20组、②Anti-CD20+IL-10组、③IL-10组和④生理盐水对照(Normalcontrol,NC)组。分别于第1d、第8d、第15d和第21d静脉给予Anti-CD20、Anti-CD20+IL-10、IL-10和生理盐水治疗。定期监测小鼠体质量、尿糖及血糖,治疗12w后麻醉下取小鼠血清测定Insulin、IL-10、CD20和CD19水平。分离胰腺行病理切片HE染色及免疫组化观察胰岛炎症浸润程度、TUNEL法观察胰岛β细胞凋亡情况和免疫组化检测胰腺Insulin、Caspase3、IL-10和CD20表达情况。WesternBlot和RT-PCR方法检测胰腺中Bcl-2、Caspase3和PDX-1蛋白和RNA表达情况。结果1.各组小鼠体质量终值和治疗后第4w、8w和12w小鼠随机血糖组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。观察结束时各组小鼠均未发病,且血糖维持在正常水平；2.Anti-CD20和IL-10联合治疗可使血清中Insulin和IL-10水平升高(vsAnti-CD20组、NC组,P=0.0002;vsIL-10组,P=0.01)；各组血清CD20和CD19水平比较,差异均无统计学意义。Anti-CD20、IL-10单独治疗组胰腺中Insulin、IL-10蛋白高表达,联合治疗组较单独治疗组Insulin、IL-10蛋白胰腺局部表达水平更高(P<0.0001)：3.Anti-CD20组、IL-10组胰岛炎积分(Anti-CD20组vsNC组,P=0.0029：IL-10组vsNC组,P=0.0066)、β细胞凋亡率(NC组vsAnti-CD20,p=0.0001;NC组vsIL-10组,P=0.001)均明显低于NC组；而Anti-CD20+IL-10组胰岛炎积分(P<0.0001)、β细胞凋亡率(vsIL-10组、NC组,P<0.0001；vsAnti-CD20组,P=0.001)显著低于单独治疗组和NC组；4.免疫组化结果显示：Anti-CD20组、IL-10组Caspase3蛋白低表达,Caspase3蛋白表达水平联合治疗组较IL-10组更低(P=0.0055)；联合治疗组与Anti-CD20组、IL-10组和NC组比较,CD20表达量显著升高(vsIL-10组、NC组,P<0.0001；vsAnti-CD20组,P=0.0004)。WesternBlot和RT-PCR结果显示：小鼠Anti-CD20+IL-10治疗后,小鼠胰腺中Caspase3凋亡蛋白局部表达、蛋白定量和RNA定量均显著降低：胰腺中Bcl-2、PDX-1蛋白和RNA表达量均明显高于单独治疗组和生理盐水组,P<0.01。结论1Anti-CD20+IL-10联合干预维持动态血糖和体质量变化在正常范围；2.Anti-CD20、IL-10单独干预可以减轻胰岛炎症程度,Anti-CD20+IL-10联合治疗使以上作用更加显著；3.Anti-CD20+IL-10联合干预增加血清胰岛素、IL-10水平和其在胰腺局部表达水平；4.Anti-CD20和/或IL-10干预可减轻胰岛B细胞凋亡率,使Caspase3蛋白和RNA低水平表达,联合干预起到协同作用。同时增强抗凋亡蛋白、PDX-1蛋白和RNA表达。有效发挥细胞免疫调节和β细胞保护作用,减少胰岛B细胞凋亡和损伤,从而更好的保护残存胰岛B细胞的数量和功能。
【作者】张丽娟；
【导师】李堂；
【作者基本信息】青岛大学，儿科学，2014，博士
【关键词】抗CD20单克隆抗体；白细胞介素10；凋亡；NOD小鼠；1型糖尿病；

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