五味子脂A增强紫杉醇和卡铂对Skov3的抑瘤作用及机制研究

【摘要】卵巢癌是病死率最高的妇科恶性肿瘤，以紫杉醇（paclitaxel,PTX）和卡铂（carboplatin,CBP）联合化疗的标准方案是治疗卵巢癌的重要手段，但具有选择性差、毒副作用强、易产生耐药等缺点。中药治疗以其毒性低、效率高的优势成为卵巢癌的辅助治疗手段之一。近年来研究表明，五味子有效成分具有逆转耐药、抑制增殖、促进凋亡、抗炎、抗氧化、提高免疫力等作用。本实验选取五味子有效成份——五味子脂A(GomisinA,GA)作为研究对象，观察GA分别与紫杉醇和卡铂联合应用对卵巢癌Skov3细胞凋亡的影响，并初步探讨其作用机制，为更加合理、有效的临床化疗联合用药方案提供实验依据。本研究应用体外培养的人浆液性囊腺性卵巢癌细胞Skov3，分别设空白对照组、五味子脂A组、紫杉醇组、卡铂组、五味子脂A联合紫杉醇组和五味子脂A联合卡铂组，MTT法检测各给药组细胞的增殖抑制率。选取抑制率在30%左右、IC50值下游的浓度作为给药浓度，作用48小时后，相差显微观察细胞形态；流式细胞仪检测细胞凋亡率；TUNEL染色观察细胞凋亡指数；JC-1染色检测细胞线粒体膜电位；克隆形成实验检测细胞形成克隆能力；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力；RealtimePCR检测Bax、Caspase3、Bcl-2、Stat3、MMP2、MMP9基因的转录；Western-blot检测细胞Bax、Bcl-2、Caspase3、MMP2、MMP9、STAT3、AKT1、pAKT1、Cytc蛋白的表达。实验结果显示，五味子脂A单独应用可轻度抑制Skov3，紫杉醇、卡铂可明显抑制Skov3细胞增殖，且其作用呈剂量依赖效应。五味子脂A联合紫杉醇、五味子脂A联合卡铂对Skov3细胞均具有协同抑制作用。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率、TUNEL染色检测细胞凋亡指数、JC-1检测细胞线粒体膜电位变化，发现与单独用药相比较，五味子脂A可分别增强紫杉醇、卡铂诱导Skov3细胞凋亡的作用，其中五味子脂A与紫杉醇联合应用效果更为显著。RealtimePCR结果显示，五味子脂A与紫杉醇、卡铂联合应用后，Bax、Caspase3转录水平上调，Bcl-2、Stat3、MMP2、MMP9转录水平下调。Westernblot检测结果显示：五味子脂A与紫杉醇、卡铂联合应用后，Bax、Caspase3蛋白表达上调，Bcl-2、MMP2、MMP9、STAT3、AKT1、pAKT1及Cytc蛋白表达下调，联合给药组上调更明显；单独给药组均不同程度下调蛋白表达，联合给药组下调更明显。本研究结果提示，五味子脂A可抑制卵巢癌Skov3细胞增殖、促进其凋亡；五味子脂A与紫杉醇、卡铂联合应用对卵巢癌Skov3细胞可发挥协同抑制作用，增强紫杉醇和卡铂的促凋亡作用，联合应用可能发挥化疗的减毒增效作用。其可能的分子机制是：通过下调Bcl-2、AKT1基因表达，上调Bax、Caspase3、Cytc基因表达来促进凋亡；通过下调MMP2、MMP9的表达，抑制Skov3细胞的侵袭和转移；抑制STAT3蛋白的表达，从而减少p-STAT3的生成，阻断JAK-STAT信号转导通路，抑制癌细胞增殖。本研究为五味子脂A与化疗药联合应用治疗卵巢癌提供理论依据和实验基础。
【作者】上官梦原；
【导师】赵淑华；
【作者基本信息】吉林大学，临床医学，2014，硕士
【关键词】五味子脂A；紫杉醇；卡铂；卵巢癌；细胞凋亡；

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