乙醛脱氢酶1启动子-RFP和pCMV-GFP共表达慢病毒载体的构建与鉴定

【摘要】目的：构建乙醛脱氢酶1(ALDH1)基因启动子-红色荧光蛋白(RFP)和pCMV-绿色荧光蛋白(GFP)共表达的慢病毒载体（简称为FU-pALDH1-R-CGW），为稳定转染膀胱癌干细胞、建立特异性膀胱癌干细胞示踪模型奠定基础。方法：将PCR扩增的ALDH1基因启动子、红色荧光蛋白的编码序列、质粒pCDNA3.0的polyA片段和通过酶切方法获得的真核启动子pCMV片段，利用基因克隆的方法分别插入到慢病毒表达载体FU-GW的GFP编码区的上游，构建ALDH1启动子-RFP和pCMV-GFP共表达慢病毒载体（FU-pALDH1-R-CGW）。将测序正确的慢病毒载体主体质粒FU-pALDH1-R-CGW和包膜质粒pCMV-VSVG及包装质粒pMDLg-pRRE、pRSV-Rev共转染293T细胞，根据GFP的表达率确定转染效率，获得病毒后感染人膀胱癌5637干细胞株。结果：1.构建的慢病毒表达载体FU-pALDH1-R-CGW经酶切反应鉴定正确，测序分析证实上述片段均与预期一致。2.慢病毒质粒及包装质粒共转染293T细胞后,荧光倒置显微镜下可观察到明显绿色荧光。结论：1.成功地构建了携带ALDH1启动子-RFP和pCMV-GFP两个基因表达框架的慢病毒表达载体（FU-pALDH1-R-CGW）。2.初步地建立了用慢病毒表达载体转染293T细胞的实验体系。
【作者】王海明；
【导师】许宁；
【作者基本信息】吉林大学，外科学，2014，硕士
【关键词】乙醛脱氢酶1；红色荧光蛋白；绿色荧光蛋白；慢病毒载体；膀胱癌干细胞；

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