尼美舒利诱导人胶质瘤U87细胞凋亡的机制

【摘要】目的：本实验拟通过MTT法、吖啶橙（AO）/溴乙啶(EB）荧光染色法、流式细胞术、Western印迹等方法，观察尼美舒利在体外对胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法：取胶质瘤U87细胞培养18小时，根据尼美舒利作用的不同浓度分组：0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mmol/L，不同的作用时间分组：12、24、48h；然后采用四甲基耦氮唑蓝（MTT）法计算胶质瘤U87细胞抑制率；吖啶橙（AO）/溴乙啶（EB）荧光染色法和AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测U87细胞凋亡率的变化；最后使用Westem印迹法观察U87细胞中Cox-2、Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果：（1）MTT法分析，发现用含不同浓度的尼美舒利溶液分别培养U87细胞12、24、48小时后，细胞生长被明显抑制，且与药物作用时间-浓度正相关。（2）吖啶橙（AO）/溴乙啶(EB）荧光染色和透射式荧光显微镜观察显示尼美舒利使胶质瘤U87细胞发生显著的凋亡形态改变；进一步应用AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪分析结果表明，尼美舒利主要使U87细胞发生在晚期凋亡，且随尼美舒利浓度的增加细胞凋亡率明显上升。（3）Western印迹凝胶电泳法发现用0.2、0.4、0.8mmol/L的尼美舒利溶液作用于U87细胞24小时后，尼美舒利不仅能剂量性地降低U87细胞中Bcl-2、Cox-2蛋白的表达，同时也可剂量依赖性地升高Bax蛋白的表达。结论：（1）尼美舒利在体外能有效地抑制胶质瘤U87细胞的生长，且细胞抑制率呈现时间-剂量依赖性；（2）尼美舒利能促进胶质瘤U87细胞凋亡，多发生在晚期，且细胞凋亡率呈剂量依赖性；（3）尼美舒利在体外能显著抑制胶质瘤U87细胞的增殖并诱导其凋亡，其作用机制可能是通过抑制Cox-2蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达，升高Bax蛋白的表达来实现其抗肿瘤作用。
【作者】张首平；
【导师】罗毅男；
【作者基本信息】吉林大学，临床医学，2014，硕士
【关键词】胶质瘤U87细胞；尼美舒利；增殖；凋亡；

【参考文献】
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