四种中国源猕猴MHC Ⅰ类分子组成的多态性和进化研究

【摘要】主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC),又称主组织相容性复合基因,是存在于大部分脊椎动物基因组中的一个基因家族,与免疫系统密切相关,其中位于白血球上的MHC又被称为白血球抗原。藏酋猴、红面猴、熊猴和平项猴是中国猕猴属的四种主要品种。为了在生物医学领域更有效地研究这些品种,我们对这四种猕猴的组成特性进行了系统的研究。在本研究中,对分别来自四川和云南的6只藏酋猴,3只红面猴,3只熊猴和3只平顶猴的MHCI类分子进行cDNA克隆和测序,从而对其进行序列分析。Mamu-B*007:03-sv1是中国猕猴主要组织相容性复合体I类分子的一种剪切异构体,其α3结构域缺失,本试验对其表达特性进行了初步的研究。本研究得出的主要结论如下：(1)本试验鉴定并获得了83条猕猴新等位基因,其中包括26条MHC-A等位基因、46条MHC-B等位基因和11条MHC-I等位基因。在这些等位基因中,初次发现Math-A1*126:01,Math-A1*127:01,Math-B*190:01,Math-B*191:01,Math-B*192:01,Maar-A1*127:01和Maas-A1*128:01与猕猴的家族血统密切相关。经进化分析,结果表明在这四种猕猴种属中并未发现明显的血统分离。本次试验对于猕猴属的这些种群MHC免疫遗传学研究提供了重要的信息,并且为生物医学中物种起源研究提供了宝贵的参考价值。(2)分别构建Mamu-B*007:03-svl-myc-pEGFPN3和Mamu-B*007:03-myc-pEGFPN3的真核表达载体,并将这两种重组质粒分别转染293T细胞。通过western-blot免疫印迹方法检测这两种基因在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦显微镜技术分别分析这两种基因在细胞内的表达定位。Mamu-B*007:03-sv1和Mamu-B*007:03基因均能在293T细胞内正常表达,Mamu-B*007:03-sv1发生了糖基化的修饰,Mamu-B*007:03基因在细胞膜上表达,Mamu-B*007:03-sv1基因在细胞内表达,Mamu-B*007:03-sv1基因的α3结构域缺失,其细胞内的表达和定位与全长Mamu-B*007:03基因有明显差异,其功能有待进一步探索。(3)构建猕猴B病毒gB和gC合成基因的杆状病毒(rBacmid).根据本室已经合成的猕猴B病毒gB基因和gC基因,利用BamHI和Xhol特异性酶切,将其亚克隆于昆虫杆状病毒的pFastBacHTA转座载体。将该阳性转座载体分别转化到DH10bac感受态细胞,筛选出阳性重组细菌,并提取重组质粒。获得了重组杆粒bacmid-gB和bacmid-gC。该研究为猕猴B病毒gB和gC蛋白在杆状病毒系统内的表达奠定了基础。
【作者】严翔；
【导师】何剑斌；孙兆增；
【作者基本信息】沈阳农业大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】鉴定；主要组织相容性复合体；猕猴；表达与定位；

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