PRRSV多肽对CSF、PRRS免疫猪淋巴细胞亚群的影响

【摘要】猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）以猪繁殖障碍和呼吸道疾病为特征。1996年该病在我国首次爆发并迅速传播，目前已成为危害我国养猪业重要的疫病之一。PRRS难以控制的原因除了PRRSV的变异外，还有PRRSV和其他病毒的混合感染及其病毒本身的继发感染，特别是PRRSV和CSFV的共感染。因此高效PRRS疫苗的研发成为当前我国养猪业亟待解决的问题之一。其中，阐明PRRS细胞免疫保护机理和免疫过程中细胞亚群的特点，是我们解决问题的前提条件。为了检测PRRSV特异性肽对猪外周淋巴细胞表型的表达的影响，本实验室从无PRRSV和CSFV感染史的猪场，筛选出20头无CSFV、PRRSV、PRV、PCV抗体和抗原的仔猪，用于本试验。在仔猪25周龄时进行CSFV疫苗免疫接种，14d后进行PRRSV疫苗免疫接种。在PRRSV免疫14d和28d。采集猪外周血液。不抗凝血，用ELISA检测方法分别测定CSFV抗体和PRRSV抗体的表达量，根据抗体检测结果可将试验样本分为4组；抗凝血用来分离PBMC，淋巴细胞培养在5%CO2，37℃条件下培养24h后，用PRRSV-GP5（GP5aa96-104VSTAGFVHG）、PRRSV-N（Naa106-114LPTHHTVRL）特异性肽刺激并继续培养24h，用FCM检测肽刺激前后淋巴细胞表型的表达量。分析不同免疫状态各期T淋巴细胞表型的表达和不同分化阶段CD3+、CD4+、CD8+细胞群的免疫应答。结果显示，在PRRS免疫第28d，猪体产生的抗PRRSV和CSFV抗体合格的比率要比PRRSV疫苗免疫第14d高，分别是65.00%、60.00%。在疫苗免疫后PRRSV高抗体组与PRRSV低抗体组相比，CD3+数量有所增加，CD4+的数量在PRRSV高抗组中明显增加，CD8+的数量在PRRSV低抗体组中减少，CD4+/CD8+比例增高，提示淋巴细胞总数增加，淋巴细胞有向CD4+T淋巴细胞分化的趋势，机体抗病毒能力增强。将分离到的淋巴细胞培养24h后用两种PRRSV特异性肽刺激淋巴细胞并培养24h，T淋巴细胞表型的表达情况各异。PRRS免疫第14d，淋巴细胞培养24h后用PRRSV-GP5刺激培养24h，各组CD3+数量都有所增加而且肽刺激后各组之间CD3+数量无显著差异（P>0.05）；CD4+的数量减少，CSFV低抗PRRSV低抗体组CD4+细胞数量显著低于CSFV低抗PRRSV高抗体组（P＜0.05）；CD8+的数量增加，CSFV低抗PRRSV高抗体组CD8+的数量增加无显著差异（P>0.05）；CD4+/CD8+比例降低；CD4+CD8+数量增加，提示PRRSV-GP5可促进T淋巴细胞分化，增强免疫反应。在用PRRSV-N刺激培养淋巴细胞24h后，CD3+细胞数量增加但无显著差异；CD4+数量增加，CSFV低抗PRRSV低抗体组显著低于PRRSV高抗体组（P＜0.05）；CD8+的数量减少；CD4+/CD8+细胞的比值增加，CSFV高抗PRRSV高抗体组显著高于其他三组（P＜0.05）。PRRSV免疫第28d，淋巴细胞培养24h后用PRRSV-GP5刺激培养24h，CSFV低抗PRRSV高抗体组中CD3+数量显著高于CSFV高抗PRRSV高抗体组（P<0.05）；各组CD4+细胞数量无显著差异（P＞0.05）；CD4+/CD8+细胞的比值在CSFV低抗PRRSV高抗体组中显著低于其他三个组（P＜0.05）。用PRRSV-N刺激培养淋巴细胞24h后，各组CD3+细胞数量差异不显著（P>0.05）；各组CD4+数量增加且CSFV低抗PRRSV高抗体组增加的比例显著高于CSFV高抗PRRSV高抗体组（P＜0.05）；CD8+的数量减少；CD4+/CD8+细胞的比值增加且在CSFV高抗PRRSV高抗体组中增加的比值显著高于其他三组（P＜0.05）。结果表明，CSFV疫苗免疫成功能够促进PRRSV疫苗的免疫效果。PRRSV疫苗免疫宿主后，机体内淋巴细胞总数增加，机体抗病毒能力增强。PRRS免疫14dPRRSV肽刺激淋巴细胞后，CD3+细胞数增加，CD4+CD8+细胞数增加，CD4-CD8-细胞数减少，淋巴细胞分化和增殖能力增强。PRRS免疫28d，PRRSV-N肽刺激后，CD4+CD8+细胞数增加，CD4-CD8-细胞数减少；PRRSV-GP5肽刺激细胞后，CD4+CD8+和CD4-CD8-细胞数都增加，提示PRRSV肽可能会加快T细胞的分化增殖，增强淋巴细胞免疫功能。PRRSV-GP5肽和PRRSV-N分别使CD4+细胞数减少、增多，CD8+细胞数增多、减少。
【作者】郭敏；
【导师】高英杰；
【作者基本信息】吉林大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】猪繁殖与呼吸综合征；猪瘟；PRRSV多肽；淋巴细胞亚群；

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