μ型阿片肽受体（MOR）在人工诱导IBD大鼠模型中的变化规律及其作用

【摘要】炎症性肠病（IBD）是一种慢性肠道炎症性疾病，主要包括克罗恩病（CD）和溃疡性结肠炎（UC）。目前的IBD的病因还未完全明确，但与遗传易感个体的肠环境因素和不适当的宿主免疫应答相关。肠免疫系统功能的失调和宿主上皮细胞的交叉反应可能是炎症发生的主要机制。急性炎症发生期间，肠黏膜肥大细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和活化中性白细胞发生炎性浸润。抗原刺激时机体产生过度Th1应答反应导致不同促炎因子如IL-1、IL-6、TNF-、IFN-γ、IL-12和IL-18等大量增加。尽管炎症的最初目的是对抗外来抗原侵入，但在IBD中，免疫应答失调，能导致宿主肠组织损伤。在IBD患者肠黏膜中促炎细胞因子的表达显著增高，特别是细胞活性极化是炎症应答损伤的特征。神经内分泌免疫调节网络是由神经、内分泌和免疫三者共同形成的一个复杂广泛的调节网络，共同调控机体的各种生命活动过程。脑肠肽是神经内分泌免疫调节网络中的一种重要信息分子，在调节内脏感觉、免疫、分泌中扮演着重要的角色。阿片肽作为脑肠肽的一种，通过与受体结合，参与机体的免疫调节。目前发现并克隆了三种阿片肽受体，即μ型受体（MOR)、κ型受体（KOR）、型受体（DOR）。MOR是G蛋白偶联受体超家族的成员之一，表达于包括肠道的不同组织，特别是淋巴细胞、肠肌层和黏膜下层。内源和外源激动剂活化MOR对免疫具有多向作用。因此，本实验首先通过TNBS化学诱导建立IBD大鼠动物模型，检测不同组织和外周血淋巴细胞中MOR的表达水平变化，并用ELISA方法测定血清和脑脊液中MOR的内源性配体β-内啡肽（β-EP）和强啡肽（Dyn）在IBD大鼠不同发病时期的表达水平；其次分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，采用荧光定量PCR方法检测MOR激活对巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-mRNA水平的影响，并用ELISA方法检测细胞上清中IL-6和TNF-蛋白水平的变化；最后建立Caco-2单层细胞模型，检测MOR激活对细胞跨膜电阻值的影响，并采用荧光定量PCR方法检测MOR激活对Caco-2细胞紧密连接相关蛋白mRNA水平表达的影响。以此探讨MOR在大鼠炎症性肠病中的变化规律及其作用，为炎症性肠病的防治提供新的思路。结果显示，当TNBS化学诱导IBD大鼠模型后，MOR在下丘脑、胸腺和外周血淋巴细胞中的mRNA表达水平逐渐升高；和前三者相反，随着病程的发展MOR在结肠组织中的mRNA水平呈现下降趋势，在第7天达到最低值，随着炎症的逐渐消退，其水平又开始恢复正常水平。同时，β-内啡肽、强啡肽在血清和脑脊液中的蛋白浓度在病变明显期第3、7天达到最低值，但随着炎症的逐渐消退，β-内啡肽、强啡肽蛋白浓度逐渐升高。利用β-内啡肽和吗啡激活MOR能显著降低LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOS、IL-6和TNF-mRNA的表达水平，以及细胞上清中IL-6和TNF-的蛋白水平。此外，MOR激活能显著抑制TNF-诱导的Caco-2单层细胞跨膜电阻值降低与紧密连接蛋白claudin1、occludin、ZO-2和ZO-3mRNA表达的降低，并抑制claudin2mRNA表达的升高。
【作者】李洋；
【导师】柳巨雄；
【作者基本信息】吉林大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】IBD；MOR；IL-6；TNF-α；紧密连接蛋白；

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