n-3多不饱和脂肪酸对SD大鼠患2型糖尿病的防治作用以及对其凝血、纤溶系统的影响

【摘要】目的：1、阐明长期补给α-亚麻酸（α-linolenicaicd，ALA）和富含二十碳五烯酸（eicosapentaenoicacid，EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid，DHA）的深海鱼油（deep-seafishoil，FO）对普通饲料和高糖高脂饲料喂养大鼠血糖、胰岛素、血脂等多种生化指标和部分凝血-纤溶因子的影响，尤其是对高糖高脂饲料喂养大鼠患2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）及其并发微血管病的预防作用，从而为不同饮食结构人群是否需要补充n-3PUFA提供基础研究依据。2、阐明ALA和FO的补给对T2DM大鼠的各项生化指标和部分凝血、纤溶因子的影响，从而为T2DM人群是否需要补充n-3PUFA提供基础研究依据。3、考察灌胃n-3PUFA对SD大鼠血清游离脂肪酸的影响，从代谢产物水平探讨n-3PUFA对大鼠产生作用的原因；同时考察血清游离脂肪酸含量变化与大鼠各项生化指标的相关性，探讨血清游离脂肪酸对大鼠IR和凝血、纤溶系统的影响。方法：1、第一部分实验用普通饲料喂养大鼠模拟正常饮食人群，用高糖高脂饲料喂养大鼠模拟高糖高脂饮食人群。将140只SD大鼠随机分为14组，每组10只，雌雄各半，分别为：空白对照组（BC组，普通饲料喂养），高糖高脂对照组（SF组，高糖高脂饲料喂养）；普通饲料喂养的ALA高、中、低剂量组，和FO高、中、低剂量组；高糖高脂饲料喂养的ALA高、中、低剂量组，和FO高、中、低剂量组。ALA和FO各组大鼠根据分组情况，每天分别灌胃给予600、300和150mg/kg三个剂量的ALA和FO，一共连续灌胃8周。末次灌胃后当日晚禁食不禁水12h，次日晨将大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹腔主动脉取血，分离血清用于测量肝功、肾功、血糖、胰岛素、血脂四项、凝血四项和部分凝血-纤溶因子等生化指标。2、第二部分实验利用高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）腹腔注射的方法，制备T2DM大鼠模型。待T2DM大鼠血糖稳定之后，将血糖浓度稳定在7.8~15mmol/L的大鼠随机分组成8组，每组10只，雌雄各半，分别为：2型糖尿病对照组（T2DM组），罗格列酮对照组（rosiglitazone，ROS组），ALA和FO高、中、低剂量组。另取10只未造模大鼠做空白对照组（BC组）用普通饲料喂养；T2DM组，ROS组，ALA和FO高、中、低剂量组继续用高糖高脂饲料喂养。ALA和FO各组大鼠根据分组情况，每天分别灌胃给予600、300和150mg/kg三个剂量的ALA和FO，一共连续灌胃4周。末次灌胃后当日晚上禁食不禁水12h，次日晨将大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹腔主动脉取血，分离血清用于测量肝功、肾功、血糖、胰岛素、血脂四项、凝血四项和部分凝血-纤溶因子等生化指标。3、第三部分实验是对在第一和第二部分实验研究中得到的血清样品，用GC-MS进行游离脂肪酸的含量测定，并将含量测定结果与各项生化指标进行相关性分析。结果：1、ALA灌胃8周对不同饲料喂养大鼠的各项生化指标都没有显著性影响。FO对高糖高脂饲料喂养导致的AST、TC水平升高有降低作用（p<0.01、p<0.05），同时能使高糖高脂饲料喂养导致的hs-CRP升高趋势加强（p<0.01）；对不同饲料喂养大鼠都有抑制胰岛素分泌和升高血糖的作用（p<0.05）。2、ALA对不同饲料喂养大鼠的凝血和纤溶系统都没有显著性影响。FO对普通饲料喂养大鼠的凝血四项没有影响，但是FO和高糖高脂饲料的同时摄入会导致大鼠APTT显著性降低（p<0.05）。3、n-3PUFA对T2DM大鼠具有抑制AST升高的作用，并且FO的抑制作用较ALA强，与T2DM组相比有显著性意义（p<0.05）。除此之外，n-3PUFA对T2DM大鼠的其他各项生化指标都不存在显著性的影响。4、灌胃ALA对不同饲料喂养大鼠血清游离脂肪酸都没有显著性影响，无法引起血清EPA和DHA含量的异常升高。高糖高脂饲料喂养能使血清中C18:1的含量显著升高（p<0.01）。灌胃FO能使不同饲料喂养大鼠血清中的C22:6含量明显升高（p<0.05），并呈一定量效关系。5、与BC组相比，T2DM组大鼠血清游离脂肪酸含量显著地升高（P<0.01）；n-3PUFA的补给对T2DM大鼠各游离脂肪酸含量的升高并无显著性影响。6、不同饲料喂养大鼠血清C18:1的含量与hs-CRP、TC、LDL、FIB和TAT呈正性相关（p＜0.01）；而血清中C22:6的含量与FBG和hs-CRP呈正性相关（p＜0.01和p＜0.05），与FINS和HOMA-IS呈负性相关（p＜0.01）。7、T2DM大鼠血清游离脂肪酸（C16:0、C18:0、C18:1、C18:2、C20:4和C22:6），都分别和以下生化指标呈正性相关（P<0.01或P<0.05）：ALT、Ure、FBG、HOMA-IR、hs-CRP、TC、TG、HDL-C、FIB、LDL-C、TAT、t-PA和PAI-1，同时都分别和以下生化指标呈负性相关（P<0.01）：HOMA-IS和APTT。结论：1、ALA对不同饲料喂养的正常大鼠和T2DM大鼠各项生化指标都无显著性影响。2、FO对高糖高脂饮食导致的正常大鼠AST和TC升高有一定的抑制作用，但是于此同时，FO和高糖高脂饲料同时摄入，会导致正常大鼠体内炎症增加和凝血功能亢进。此外，FO的长时间过量摄取会引起血液中DHA（C22:6）含量升高，导致正常大鼠胰岛β细胞损伤，胰岛素分泌能受损，增加大鼠患糖尿病的风险。3、FO对T2DM大鼠除了有一定的抑制AST升高作用之外，没有其他辅助治疗的作用。4、长时间高剂量摄入n-3PUFA对普通SD大鼠的负面影响远多于正面影响，普通人群是否应该额外补充该类保健食品还需更多的临床研究证据支持。n-3PUFA对T2DM大鼠的辅助治疗作用很小，T2DM患者是否应该额外补充该类保健食品同样也需要更多的临床研究证据支持。
【作者】潘小姣；
【导师】夏宁；
【作者基本信息】广西医科大学，内科学，2014，博士
【关键词】n-3PUFA；ALA；深海鱼油；2型糖尿病；凝血-纤溶系统；游离脂肪酸；

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