稳心颗粒通过增强Cx43表达抗心肌缺血作用的研究

【摘要】背景：缺血性心脏病是现今最常见的心血管疾病之一，心肌缺血可启动一系列的病理生理过程，最终致使心脏功能的障碍。众多动物实验及临床观察发现，已经存在缺血的心肌组织再灌注后，虽恢复了血液供应，但同时却加重了单纯心肌缺血造成的损伤，进而出现了心律失常、梗死面积扩大、持久性的心肌收缩功能低下等情况。因此，揭示缺血再灌注损伤（IRI）可能的发病机制便成为了进一步治疗缺血性心脏病的研究靶点。心脏缝隙连接（GapJunction,GJ）是心肌细胞之间通讯的重要结构基础，主要是实现细胞间的电偶联及化学信息交换。而缝隙连接蛋白43（Cx43）在心脏的发育及心脏疾病中发挥重要作用。有报道指出，心肌细胞的缺血再灌注损伤可导致Cx43重塑，即其结构及功能的改变，而这种改变与IRI引起的细胞内钙超载、大量氧自由基生成、酸中毒有关。近几年在有关心肌保护的研究中，通过缺血预处理的方法来调节Cx43的表达，被证实可以有效地减轻缺血再灌注损伤。稳心颗粒作为对心肌细胞具有多种离子通道抑制作用的中成药，能治疗多种心律失常。现有研究表明稳心颗粒可以通过降低心肌耗氧、清除自由基、抑制脂质过氧化等途径，改善心肌缺血、保护心脏。目的：观察稳心颗粒对大鼠缺血心肌细胞中Cx43表达的影响，探讨稳心颗粒上调Cx43表达的可能机制。方法：本实验将60只雄性Wistar大鼠（220-250g），随机分为4组，即假手术组、模型组、稳心颗粒低剂量和稳心颗粒高剂量组，每组15只。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法建立在体缺血再灌注损伤模型，其中假手术组只穿线不结扎。模型组、稳心颗粒低剂量和高剂量组结扎左冠脉前降支30min，再灌注60min。留取大鼠心肌组织标本，应用HE染色法观察心肌细胞形态学变化。用免疫组织化学S-P法检测Cx43蛋白在四组IR心肌中的分布及表达水平的改变。测定并分析缺血时和再灌注后各组大鼠心肌组织Ca2+-ATP酶含量；血清中CK、LDH含量；用硫代巴比妥酸法测超氧化物歧化酶（SOD）活力；用黄嘌呤氧化酶法测丙二醛（MDA）的含量。结果：1、模型组同假手术组比较，心肌酶显著升高(P<0.01)；血清MDA浓度明显升高(P<0.01)、血清SOD活性降低(P<0.05)；Ca2+-ATP酶活性降低(P<0.05)。心肌组织学形态学改变明显，镜下心肌纤维排列紊乱，可见断裂、崩解、坏死；核固缩；胞浆染色淡、空泡变性；大量炎性细胞浸润。免疫组化检测Cx43棕黄色颗粒状阳性染色物质的分布不均，失去正常规律性，表达明显降低，差异显著(P<0.01)。2、在稳心颗粒低剂量组及高剂量组与模型组比较中，心肌酶均低于模型组(P<0.01)；血清MDA浓度明显降低(P<0.05)、血清SOD活性增高(P<0.05)；Ca2+-ATP酶活性增加(P<0.05)。心肌组织学形态学变化改善，镜下心肌纤维排列尚有序，少见断裂；胞浆染色略淡；少许炎细胞浸润。免疫组化检测Cx43棕黄色颗粒状阳性染色物质着色斑点大小较一致、分布紊乱程度减轻。表达明显增高(P<0.05)；而稳心颗粒高剂量组中Cx43表达较低剂量组有所增加，呈剂量依赖性趋势，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：稳心颗粒能通过上调Cx43表达减轻缺血再灌注心肌的损伤程度，其机制与提高Ca2+-ATP酶活性及增加抗氧化能力有关。
【作者】刘笑菲；
【导师】孙健；
【作者基本信息】吉林大学，临床医学，2014，硕士
【关键词】稳心颗粒；心肌缺血；Cx43；钙超载；氧自由基；

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