肺炎链球菌StkP蛋白疫苗研究

【摘要】肺炎链球菌会在鼻咽部、支气管或者肺内定殖并引起肺炎、脑膜炎、中耳炎、菌血症等疾病，在老年人和儿童中发病率较高。但近些年来肺炎链球菌的耐药性与多种血清型的问题，使得研制疫苗成为预防其感染的主要手段。世界卫生组织推荐使用上市的肺炎荚膜多糖疫苗和肺炎多糖-蛋白结合疫苗预防肺炎链球菌感染。然而现存疫苗由于覆盖的血清型有限、保护人群具有限制性，使得研制蛋白疫苗的成为重要方法。本论文利用原核表达系统构建肺炎链球菌StkPC314蛋白，评价其作为疫苗候选的免疫原性和免疫保护性。本论文选用肺炎链球菌丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Serine-Threoninekinaseprotein，StkP）C末端截短314为氨基酸作为蛋白疫苗，命名为StkPC314。将StkPC314基因进行大肠杆菌密码子优化，设计合成StkP截短的基因序列后，通过分子克隆构建表达质粒pET20b-stkpC314，使其在大肠杆菌BL21中表达蛋白。将表达并纯化的后高纯度的StkPC314蛋白免疫小鼠，以间接ELISA实验检测到高滴度的小鼠血清多抗，说明StkPC314具有较高免疫原性。然后建立肺炎链球菌的小鼠腹腔感染模型，通过免疫保护实验对StkPC314免疫保护性进行了初步评价。此实验还确定了最适免疫蛋白剂量为20μg/只，最适免疫佐剂为弗氏佐剂。小鼠肺炎链球菌攻毒模型说明StkPC314蛋白有较高免疫原性和免疫保护性，作为蛋白疫苗候选具有很大的潜力。为建立StkPC314免疫蛋白原的精确定量方法，本论文通过杂交瘤细胞技术筛选出5株能够分泌特异性StkPC314单克隆抗体的杂交瘤细胞，经培养、收集、纯化得到高纯度的单克隆抗体，对单克隆抗体进行相对亲和力分析、结合位点的分析、Ig亚类分型等分析。以5株混合单抗作为标准品，建立间接ELISA方法检测小鼠抗血清含量，能够对OD450nm为0.3-1.3范围内的小鼠多抗血清进行精确定量。为建立有效的抗原蛋白StkPC314检测方法，将单克隆抗体进行生物素化标记后，与兔多抗联合建立双抗夹心ELISA方法，实现对抗原StkPC314蛋白精确定量，精确的抗原定量范围是12.2-97.6ng/ml，抗原蛋白StkPC314的最低检测线是12.2ng/ml。
【作者】徐曼；
【导师】吴永革；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】肺炎链球菌；StkP；双抗夹心ELISA；McAb；疫苗；

【参考文献】
[1]秦杰.中小学校本教研管理存在的问题及对策[D].内蒙古师范大学,教育管理（专业学位）,2012,硕士.
[2]康佩佩.总铁结合力与冠心病关系的研究[D].山东大学,流行病与卫生统计学,2013,硕士.
[3]查良玉.机械开沟秸秆集中沟埋还田技术低碳特点与经济效益分析[D].南京农业大学,生态学,2013,硕士.
[4]祝立根.用于超级电容器的聚吡咯复合织物电极材料的制备及性能研究[D].武汉纺织大学,2014.
[5]英爱平.“水晕墨章，兴吾唐代”新论[D].首都师范大学,美术学,2004,硕士.
[6]张颖.中国股价指数实证研究[D].东北财经大学,金融学,2003,硕士.
[7]邵成成,王锡凡,王秀丽,杜超.考虑风电的电力联营市场日前出清模型[J].电力系统自动化,2014,13:45-50.
[8]王宏波.北方交通重工集团结构件制造车间生产物流优化研究[D].沈阳工业大学,工业工程,2013,硕士.
[9]张树财.赤峰健行体教公司物流成本控制研究[D].吉林大学,交通运输工程,2013,硕士.
[10]汪船.600m深表土中内层钢板—钢筋混凝土复合钻井井壁力学性能的研究[D].煤炭科学研究总院,岩土工程,2003,硕士.
[11]李鹏翠.MicroRNA-1通过抑制HDAC4调控软骨细胞表型研究[D].山西医科大学,骨外学,2014,博士.
[12]张飞翔.人民币汇率升值背景下产业升级对装备制造业贸易形势的影响分析[D].沈阳工业大学,国际贸易学,2013,硕士.
[13]王志波.矿井安全监测监控系统的研究[D].内蒙古科技大学,采矿工程,2014,硕士.
[14]王志恒.工程重大安全事故罪研究[D].大连海事大学,法律,2014,硕士.
[15]孟晗.解禁企业间借贷的法律思考[D].浙江大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[16]邓丽萍,纪靓靓,白朝暾.二氧化锰改性碳纳米管对四环素和泰乐菌素的吸附[J].农业环境科学学报,2015,04:781-786.
[17]张少华,李渝曾,言茂松.考虑用户需求不确定性的电力期货合同模型[J].控制与决策,1999,S1:536-540.
[18]王艳霞.图像轮廓提取与三维重建关键技术研究[D].重庆大学,2010.
[19]高婷婷,于波,王道爱,周峰.还原氧化石墨烯表面聚苯胺纳米阵列的制备及电化学电容性能[J].化学通报,2014,11:1083-1087.
[20]王炳忠.某型空分设备仿真训练系统研究[D].东北大学,工程热物理,2010,硕士.
[21]罗立昱.国际海底制度与南北关系[D].南京大学,专门史,2013,硕士.
[22]李婷婷.东北三省中医药大学学生课外体育活动现状与对策研究[D].东北师范大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[23]陈乾君.基于FPGA的全感应交通灯控制系统设计[D].长安大学,智能交通与信息系统工程,2014,硕士.
[24]宋慧丽.论微博语境中我国公民新闻的新发展[D].山东大学,新闻学,2013,硕士.
[25]常进官.周边桁架式可展开天线展开分析与控制[D].大连理工大学,动力学与控制,2013,硕士.
[26]文军.足踝部关节在体运动度数字化三维测量新方法的建立及其初步应用研究[D].南方医科大学,创伤骨科,2012,硕士.
[27]韩梦.城镇化下我国北方省份集中供热耗煤预测及节能潜力分析[D].中国矿业大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[28]刘莎莎.双极性窄脉冲事件与雷暴对流强度相关性研究[D].中国气象科学研究院,大气物理学与大气环境,2014,硕士.
[29]刘尚阳.基于价值网的产业地产企业核心竞争力构成要素研究[D].重庆大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[30]汤明.论转型时期的私营企业成长[D].北京交通大学,2006.
[31]吕佳容.纺织学术论文摘要中外壳名词的词汇语法特征研究[D].东华大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[32]陈斌.浙商银行嘉兴地区中小企业供应链融资风险管理研究[D].吉林大学,工商管理,2014,硕士.
[33]吕鲁杰.济南市初中武术教学中学生逆反心理的分析与对策[D].山东师范大学,体育（专业学位）,2013,硕士.
[34]房健.NM23、KI67基因在食管癌中表达及其与临床TNM分型和预后的关系[D].河北医科大学,外科学（专业学位）,2013,硕士.
[35]林豪慧.搜索引擎的智能检索机制[J].图书情报工作,2003,11:86-89.
[36]宁玉宝,郑建勇,陈志飞.星接链式静止同步补偿器在直流融冰的应用[J].电力系统自动化,2015,06:95-100.
[37]吴健.分数幂非线性系统的控制设计[D].西安电子科技大学,运筹学与控制论,2012,硕士.
[38]袁纪武,张维凡.化学事故应急救援知识讲座第七讲液化石油气事故现场应急救援预案[J].劳动保护.2004(04)
[39]李凌云.中国社会保障制度地区差异的协调机制[D].华东政法学院,经济法学,2003,硕士.
[40]乌旭琼.商务电子邮件英语的特点和常见错误分析[D].上海外国语大学,英语语言文学,2013,硕士.
[41]王龙飞.基于Petri网的城轨列车设备故障应急处置流程优化方法的研究[D].北京交通大学,2014.
[42]曹霞.冯小刚喜剧电影的品牌传播研究[D].重庆工商大学,传播学,2014,硕士.
[43]应丹丰.不确定条件下基于双重供货模式的装配系统协同优化[D].华中科技大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[44]李川.农村群体性事件的产生与治理研究[D].西南大学,社会学,2013,硕士.
[45]闫静静.基于旅游者行为的辽西走廊区域旅游发展研究[D].渤海大学,旅游管理,2013,硕士.
[46]邢亚娟,陈宏源,陈名海,姚亚刚,李清文.碳纳米管在热管理材料中的应用[J].科学通报,2014,Z2:2840-2850.
[47]钟兴龙.《唐六典》撰修研究[D].吉林大学,历史文献学,2004,硕士.
[48]张伟.基于自然计算的矢量量化码书设计算法的研究[D].西安电子科技大学,电路与系统,2012,硕士.
[49]闫汉魁.一类奇数阶及混合型方程的定解问题[D].新疆师范大学,基础数学,2013,硕士.
[50]徐勇.电能质量监测仪设计[D].大连理工大学,控制理论与控制工程,2004,硕士.