Bif-1在肝癌中的生物学功能及作用机制研究

【摘要】研究背景肝癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是世界上肿瘤发病率中第五名，在中国占第二位，每年约有32万肝癌病例，约占全球发病率的55%。由于早期症状不典型，临床确诊的肝癌多数已是肝癌的三到四期，并伴有门脉癌栓形成或肺转移。大约90%以上肿瘤所致的死亡要归咎于肿瘤转移和复发。因此，研究肿瘤转移的发生机制及抑制肿瘤转移的治疗手段是肿瘤防治中的重要环节。研究目的通过对Bif-1影响细胞增殖和移动的分子机制及其相互作用的研究，深入探讨肿瘤生长转移的分子机制，为抑制肿瘤转移和生长提供新的靶点和理论依据。实验方法第一部分Bif-1在肝癌中的表达及其与临床预后的关系通过检测肝癌和癌旁组织样本中Bif-1在mRNA水平和蛋白水平的表达水平，进一步明确其在成对的样本中的表达趋势，并且组织芯片将目的基因在不同组织样本中的表达情况与临床资料相互联系，分析Bif-1与肝癌患者肿瘤大小、肿瘤分期、转移、癌栓形成、肿瘤复发等临床特征之间的关系，并对有统计学差异的临床特征在细胞水平进行进一步研究，并结合随访结果探讨目的基因与患者预后（无瘤生存期和总体生存期）的关系。第二部分Bif-1对肝癌细胞生物学功能的影响及作用机制研究在不同的肝癌细胞系中（CSQT-2，MHCCLM3，HepG2）进一步用qRT-PCR检测目的基因的表达情况。用RNAi技术对目的基因进行干扰，观察细胞相关的生物学功能的改变情况。并根据其生物学功能的改变进一步对其作用机制进行研究，明确其相互作用及其信号调控网络。结果第一部分：RT-PCR结果显示在50对癌和癌旁之中，Bif-1有42对组织Bif-1的表达是在癌组织高于癌旁，同时WesternBlot的结果也反映了同样的表达趋势。另根据组织芯片染色和临床资料统计分析结果显示Bif-1的表达与肿瘤的大小，门静脉癌栓的形成，肿瘤微血管侵犯和复发这四个临床指标有一定的相关性。术后生存分析也发现Bif-1能够影响肝癌患者术后的无瘤生存期（P=0.035）和总体生存期（P=0.047），因此，Bif-1可望成为一个新的评价肝癌患者预后的指标。第二部分：Bif-1的表达能够促进肝癌细胞的增殖和在裸鼠体内的成瘤性。我们发现在肝癌细胞中的表达Bif-1能促进肝癌细胞的转移能力（Transwell），侵袭能力（Invasion）和细胞极性的形成，而干扰Bif-1的表达，则引起细胞骨架蛋白Cdc42下降及其活性降低，并且Bif-1含量与Cdc42表达呈正相关调控。Bif-1免疫荧光染色揭示Bif-1可出现在细胞核。，核质分离实验在细胞核蛋白中证实了这一结果。染色质免疫共沉淀实验表明Bif-1能够在基因水平调控Cdc42的转录。结论本课题通过临床肝癌样品，HCC细胞和各种研究手段，研究了Bif-1在肝癌细胞增殖、转移等细胞生物学行为的作用，揭示了Bif-1在肝癌组织中表达升高并参与肿瘤的生长和转移。Bif-1调节肿瘤转移的机制是通过对影响Cdc42表达和活性。同时，Bif-1在肝癌组织中的水平，与肿瘤大小和肝内转移的发生有关，后者是影响预后的主要原因。因此，Bif-1可成为判断肝癌预后的一项新指标，抑制Bif-1的表达可望成为抑制肝肿瘤的新靶点。本课题创新点及潜在应用价值明确了Bif-1的表达与肝癌患者临床预后的关系，为肿瘤的临床研究提供一定参考依据，并且首次发现了Bif-1在细胞核中表达通过调控促进Cdc42的转录和其蛋白的活性促进肝癌细胞增殖和转移的机制，为后续研究肝癌的转移提供了新的思路和方向。
【作者】张存圳；
【导师】程树群；
【作者基本信息】苏州大学，外科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】肝癌；Bif-1；转移；增殖；Cdc42；

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