PI3K抑制剂BEZ235在MGMT阳性的胶质瘤细胞治疗的研究

【摘要】神经胶质瘤是具有高度恶性，高侵袭性的原发脑肿瘤。多形性胶质母细胞瘤（GBM）是最常见、最致命的。目前主流的治疗方法是多种方法结合处理，一些适当的辅助治疗会延长患者的生存预期。目前的神经胶质瘤治疗包括在安全情况下最大限度的切除肿瘤，联合术后放疗及口服DNA烷化剂。替莫唑胺（TMZ）的疗效根据GBM的组织来源及甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）启动子的甲基化的情况有所不同。NVP-BEZ235被证明在体内和体外是通过抑制自噬和增加细胞凋亡提高TMZ对恶性胶质瘤的疗效。PI3K参与NF-κB-MGMT调节。也有将PI3K抑制剂与TMZ联合治疗以提高疗效的研究。PI3K抑制剂能够抑制肿瘤生长。因为现阶段PI3K抑制的研究，BEZ235作为一个具有潜在抗肿瘤的药物已经作为第一批PI3K抑制剂作为临床试验中。本研究主要目的在于测试在耐化疗的MGMT阳性的胶质瘤细胞系中TMZ和BEZ235联合治疗是否比单独BEZ及TMZ治疗抗肿瘤活性更加有效。本课题从三个方面对PI3K抑制剂BEZ235在MGMT阳性的胶质瘤细胞治疗的研究：1.PI3K/Akt/mTOR抑制剂之一NVP-BEZ235对肿瘤细胞增殖的影响。2.BEZ235对相关肿瘤细胞甲基化和非甲基化程度的影响。3.比较细胞系各处理组中MGMT蛋白表达情况。目的：探讨MGMT阳性肿瘤细胞系与MGMT阴性细胞肿瘤细胞系之间TMZ治疗效果差距，同时通过对PI3K/mTOR抑制剂的NVP-BEZ235联合常规胶质瘤化疗药物TMZ联合运用，研究不同情况下联合处理后是否能提高对耐TMZ的MGMT阳性胶质瘤细胞株的治疗效果。方法：实验选取MGMT阳性胶质瘤细胞系T98G及MGMT阴性细胞系A172，将对数期的细胞接种于6孔板、96孔板中，实验分为对照组和实验组，在A172肿瘤细胞系内，使用TMZ处理组及不使用药物组。T98G细胞系内，对照组不使用任何药物，处理组又分为单独使用抗肿瘤药物TMZ组，单独使用PI3K/Akt抑制剂BEZ235组，TMZ联合PI3K/Akt抑制剂BEZ235组。1.在24,48,72小时处理时间中使用MTT法分析肿瘤细胞系个实验组增殖抑制率，了解各组处理后细胞增殖抑制率的效果及程度。2.使用MethylationPCR比较T98G、A172各自单独使用TMZ处理组，及T98G中TMZ联合BEZ235处理组各组的MGMT基因的甲基化及非甲基化程度。3.量化处理，使用WesternBlot实验方法检测上部分中各组的MGMTProtein表达及分析统计学意义。结果：1.TMZ在MGMT阳性细胞系T98G中效果明显较A172细胞系差，在TMZ联合使用不同浓度的BEZ235处理中，效果均较单独TMZ使用效果好。2.MethylationPCR量化处理结果提示T98G组中TMZ联合BEZ235处理效果较单独使用TMZ的A172和T98G的抑制率存在统计学意义。3.量化免疫印迹（WesternBlot）实验结果后，各实验组MGMT蛋白含量的表达也符合甲基化PCR的结果，提示了BEZ235处理后明显的减少了T98G细胞中MGMT的去甲基化程度。结论：1.MGMT阳性细胞系中单独使用TMZ效果不佳，联合使用BEZ235后，效果较单独使用增强，其增强效果存在时间及浓度依赖特点；单独使用BEZ235也对T98G细胞存在细胞杀伤性。2.在T98G细胞系中，BEZ235联合TMZ处理显示更强细胞毒性，提示BEZ235可通过NF-κB-MGMT通路及抑制肿瘤活性。3.通过甲基化PCR分析MGMT启动子的甲基化状态，作为PI3K抑制剂(PI3Ki)起作用的BEZ235能显著逆转MGMT启动子的非甲基化，进而减少MGMT蛋白表达。
【作者】时飞；
【导师】孙春明；
【作者基本信息】苏州大学，神经外科（专业学位），2014，硕士
【关键词】胶质瘤；细胞增殖；PI3K/Akt/mTOR通路；BEZ235；体外化疗；MGMT；

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