盐酸小檗碱诱导人脑胶质瘤细胞U251凋亡及其与HERG钾离子通道的表达相关研究

【摘要】目的：探究盐酸小檗碱(ber)对人脑胶质瘤细胞系U251细胞凋亡作用的影响，并且初步通过实验证明这种凋亡与调节HERG钾离子通道基因和蛋白的表达相关研究。方法：在体外实验培养人脑的胶质瘤细胞系U251，先使用不同的浓度盐酸小檗碱处理人脑胶质瘤细胞U251，用四甲基偶氮唑溴盐(MTT)染色观察细胞抑制率；Hoechst33258荧光染色法观察细胞核是否出现凋亡特征；流式细胞术(FCM)测定细胞的凋亡率以及不同阶段凋亡率的分布情况；利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法测定HERG钾通道的mRNA表达情况；应用免疫印迹法(WesternBlotting)法检测HERG钾通道的蛋白的表达情况。结果：MTT法检测结果显示随着盐酸小檗碱浓度的增加细胞抑制率呈明显的增加趋势，表现出量效与时效关系，其24小时的半效抑制浓度（IC50）是(8.78±0.20)μmol/l；Hoechst33258荧光染色法观察盐酸小檗碱处理组的细胞出现细胞核固缩，核中出现浓染颗粒，有的核中央甚至整个核都发白，并且随着药物浓度的增大，这种现象更明显，但对照组的细胞核均匀淡染；流式细胞术检测结果表明随着盐酸小檗碱的剂量增加U251细胞的早期凋亡率明显增加，并且它的晚期凋亡率及坏死率逐渐增大，其中以早期凋亡为主（P<0.05）；RT-PCR检测结果表明不同浓度的盐酸小檗碱处理后人脑胶质瘤细胞U251的HERG钾通道的mRNA含量均表达，而且随着药物浓度的增高而增高；WesternBlotting法检测结果HERG钾通道的蛋白的表达也均上调，而且随着药物浓度的增高而增高。结论：在体外，盐酸小檗碱可以抑制人脑的胶质瘤细胞系U251的增殖，并且主要是以凋亡为主，可能是通过上调HERG蛋白的表达抑制U251增殖作用的机制。
【作者】杨昊；
【导师】屈洪涛；
【作者基本信息】苏州大学，神经外科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】盐酸小檗碱；胶质瘤；U251细胞；凋亡；HERG；

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