Cofilin-1对人皮肤鳞癌A431细胞增殖和迁移能力的影响研究

【摘要】目的：本研究使用小分子干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA）沉默cofilin-1基因的表达，并观察黄芩苷和cofilin-1沉默对人皮肤鳞癌A431细胞增殖生长和迁移能力的影响，以明确cofilin-1在皮肤鳞癌发生过程中的作用，并阐明黄芩苷抗皮肤肿瘤的作用机制。方法：1、细胞培养：用10%胎牛血清的高糖培养基DMEM在37℃、5%CO2的培养箱中培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞。2、药物配制：黄芩苷中加入二甲基亚砜（DMSO），配制成浓度为40mg/ml-20℃的冰箱冷藏备用，实验时以培养基稀释为50μg/ml。3、siRNA干扰：针对cofilin-1mRNA的序列设计合成了cofilin-1特异性的siRNA，并转染人皮肤鳞癌A431细胞，运用实时定量PCR（Real-timePCR）法来检测cofilin-1基因沉默的效果。4、检测细胞增殖活性：用细胞增殖/毒性检测试剂盒（CCK8）法检测A431细胞的增殖的变化情况。5、检测细胞迁移能力：用细胞划痕试验检测A431细胞的迁移能力。结果：1.实时定量PCR结果表明，每个转染组细胞中的cofilin-1mRNA的相对的表达量都低于空白对照组，差异均有统计学的意义(P<0.05)，表明cofilin-1siRNA明显抑制了cofilin-1表达，在后继实验中，我们选择沉默效果最好的siRNA片段进行细胞实验，同时westernblot检测证实了CFL1-497-siRNA可在蛋白水平上有效抑制A431细胞中的cofilin-1的表达。2.和空白对照组比较，cofilin-1siRNA转染于细胞24h、48h、72h之后，均出现细胞增殖活性明显降低；单纯加入黄芩苷孵育后，A431细胞增殖活性同样出现不同程度下降；而当把黄芩苷合并cofilin-1siRNA干扰时，A431细胞增殖活性的抑制作用最显著，这表明沉默cofilin-1基因可显著增强黄芩苷的作用；3.细胞划痕实验结果显示，划痕后继续培养24h，各组间细胞间隙均有一定程度愈合，其中黄芩苷组及cofilin-1siRNA组与对照组相比，划痕愈合程度明显下降；而黄芩苷合并cofilin-1-siRNA干预时，细胞的迁移愈合能力则进一步下降，各组间的差异有统计学意义（P<0.05）结论：抑制cofilin-1表达及单独黄芩苷处理可明显降低皮肤鳞癌细胞的活性与迁移能力，而黄芩苷合并cofilin-1-siRNA则显著增强黄芩苷的作用效能。因此，cofilin-1基因为成为增强治疗皮肤肿瘤及药物开发的靶点。
【作者】杜纳；
【导师】钱齐宏；
【作者基本信息】苏州大学，皮肤性病学，2014，硕士
【关键词】皮肤鳞癌；cofilin-1；细胞增殖；细胞迁移能力；黄芩苷；

【参考文献】
[1]黄京.基于医学影像数据的多元模式识别分析[D].湖南师范大学,概率论与数理统计,2014,硕士.
[2]范光亮.牡丹江下游水质季节变化趋势与污水厂氮磷减排效益研究[D].哈尔滨工业大学,环境工程,2014,硕士.
[3]王兴龙.采暖地区居住建筑内部得热量研究[D].西安建筑科技大学,建筑技术科学,2013,硕士.
[4]龙建东.薄层厚度与振幅、频率关系的神经网络BP法模拟[J].石油地球物理勘探,1995,06:817-822+848.
[5]朱海宽.基于AT89S52的汽车测速与倒车提示模拟系统的设计[D].南昌大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[6]孙莉,强根荣,王海滨,裴文.理论与实践贯通的专题式有机化学实验教学的探索与实践[J].现代物业(中旬刊),2013,12:66-67.
[7]谭雪.上市公司控制权转移的市场反应研究[D].哈尔滨工业大学,会计学,2013,硕士.
[8]丁岚.内部报告体系的构建——兼论内部报告在预算控制系统中的应用[D].东北财经大学,会计学,2003,硕士.
[9]刘韬.初级汉语一对一正音训练的行动研究[D].上海外国语大学,汉语国际教育,2013,硕士.
[10]谭檑华.黄酒固定化发酵及其高级醇含量的控制研究[D].浙江工商大学,食品科学与工程,2013,硕士.
[11]朱宝山.基于PLC火电站输煤系统设计[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[12]陈洪灿.福建省财政收入计量模型研究[D].福州大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[13]杜思思.高校图书馆管理系统的分析与设计[D].云南大学,软件工程,2012,硕士.
[14]钟骞.珠三角演艺市场环境分析及思考[D].中国艺术研究院,艺术学,2014,硕士.
[15]谭显东.基于信息技术的供应链管理研究[D].华北电力大学（北京）,2005.
[16]刘延英.“酒后代驾”法律问题研究[D].兰州大学,民商法（专业学位）,2013,硕士.
[17]张细凤.调节免疫中成药与系统性红斑狼疮感染[D].山东大学,内科学（专业学位）,2014,博士.
[18]张娜娜.血管紧张素Ⅱ诱导神经细胞衰老的作用及药物干预[D].山东大学,药理学,2013,硕士.
[19]张欣.基于HMM的唇读识别技术研究[D].哈尔滨工业大学,电气工程,2013,硕士.
[20]张磊.基于混合遗传算法的分类规则挖掘方法及其并行实现[D].重庆大学,2004.
[21]张晨.谭盾的“音乐地图”[D].中央音乐学院,作曲,2012,硕士.
[22]忻莉燕.基于多阶碳足迹的供应链决策与监控研究[D].广东外语外贸大学,企业管理,2013,硕士.
[23]龙飞来.基于职业韧性的证券行业知识型员工离职倾向研究[D].辽宁大学,企业管理,2012,硕士.
[24]吴何琛.基于视觉检测的板球系统控制研究[D].内蒙古科技大学,控制工程,2014,硕士.
[25]袁晨炜.基于工业旅游导向的工业建筑设计研究[D].湖南大学,建筑学,2012,硕士.
[26]王蕾,王玮,王学运,杨国梁.基于光纤陀螺的旋转惯导数字稳定回路设计与实现[J].控制与决策,2014,08:1453-1457.
[27]田家祥.大直径金属对金属全髋关节置换术的近期疗效[D].苏州大学,骨外科,2013,硕士.
[28]魏海燕.名词化的顺应性研究[D].河南大学,英语语言文学,2004,硕士.
[29]赵斐.丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导的HK-2细胞TGF-β1/Smads信号通路影响的实验研究[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[30]周诚.中式快餐企业的发展途径研究[D].北京交通大学,2013.
[31]刘万珍.分布式冷热电联供项目财务评价体系的改进研究[D].内蒙古大学,工商管理,2013,硕士.
[32]张红曼.论我国的域名纠纷解决机制[D].华东政法学院,法律,2003,硕士.
[33]蔡淑婷.WebQuest教学模式的形成性评价研究[D].沈阳师范大学,教育技术学,2013,硕士.
[34]吕秀清.流浪乞讨人员救助管理制度研究[D].华侨大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[35]钟莉.高职学生会计职业道德教育刍议[J].商,2014,11:147+125.
[36]王天蕾.ABC公司ERP系统财务模块设计及实施研究[D].吉林大学,会计,2012,硕士.
[37]赵建军.Web数据挖掘[J].电脑知识与技术,2005,05:67-69.
[38]贺丽琼.检察委员会专职委员制度研究[D].西南政法大学,诉讼法学,2012,硕士.
[39]何吉成.武汉市磨山景区景观结构及游憩活动的研究[D].华中农业大学,园林植物与观赏园艺,2001,硕士.
[40]赵全伟.面向可重构系统芯片的软硬件划分方法研究[D].湖南大学,计算机科学与技术,2011,硕士.
[41]张天序,翁文杰,冯军.三维运动目标的多尺度智能递推识别新方法[J].自动化学报,2006,05:641-656+658+657.
[42]张涛,徐晓苏.基于小波和人工智能技术的车辆无缝定位技术研究[J].控制与决策,2010,07:1109-1112.
[43]王刚.脉冲发射的相位式激光测距技术研究[D].西安电子科技大学,光学工程,2010,硕士.
[44]谭淑贞.含芴单元的水溶性共轭聚合物的合成与表征[D].河北大学,高分子化学与物理,2014,硕士.
[45]王静慧.基于放射性核素~(137)Cs示踪技术的布哈河流域土壤侵蚀研究[D].青海师范大学,地图学与地理信息系统,2012,硕士.
[46]陈怡群,闵启超,张晓文.挤压泵工作原理及其在施液肥机上的应用[J].农业机械学报.2005(03)
[47]马芳.拉赫玛尼诺夫《升c小调前奏曲》音乐研究[D].西安音乐学院,钢琴教学与演奏,2014,硕士.
[48]刘诗瑶.专利保险制度研究[D].北京交通大学,2014.
[49]金浩.中外引渡合作若干问题研究[D].内蒙古大学,法律,2014,硕士.
[50]饶丹.带否定关联规则挖掘算法的研究[D].华中科技大学,2004.