Ri质粒介导人参发根表达人成纤维细胞生长因子2（FGF2）的研究

【摘要】人参（PanaxginsengC.A.Meyer）系五加科（Araliaceae）多年生草本植物，含有皂苷、糖类、蛋白质、多肽氨基酸、维生素等多种活性物质。人参具有保湿润肤、抗氧化、抗紫外线对皮肤的损伤等美容功效，其提取物常作为重要成分添加在很多化妆品中。人成细胞纤维因子2(Fibroblastgrowthfactor，FGF2)在人体内含量低，但FGF2是一种有活性多功能生长因子，它在促进组织生长发育、新血管形成、参与组织创伤修复过程等临床应用方面有着巨大的前景。本研究将FGF-2基因进行了克隆和纯化，利用PCR和双酶切方法构建植物表达载体；发根农杆菌A4介导将含有FGF-2基因的植物表达载体转入到人参细胞内，最终得到含有FGF2基因的转基因人参发根系；对转基因人参发根异源表达的FGF2蛋白进行鉴定和分析。为人参发根作为生物反应器生产药用蛋白的产业开发奠定了基础，同时也为FGF2基因大量生产提供了理论基础。本文的主要研究内容与结论如下：1.植物表达载体以及工程菌构建：以pET16+FGF2载体为模板，将FGF-2基因进行大量克隆和纯化，然后利用PCR和酶切连接技术构建了植物表达载体，将构建好的载体命名为pBI121-FGF2。通过冻融法将pBI121-FGF2植物表达载体转入到发根农杆菌A4菌株中，构建工程菌命名为：A4-pBI121-FGF2。2.A4-pBI121-FGF2对人参的遗传转化：利用制备好的工程菌A4-pBI121-FGF2和空pBI121质粒分别对三年生人参根片外植体进行侵染，诱导出人参发根；转基因组人参发根和空白对照组发根都表现出正常典型的发根形态，二者在形态变化上没有显著性差异；利用分子生物学的方法筛选含有FGF2外源基因的阳性克隆人参发根。3.异源表达FGF-2蛋白的转基因人参发根鉴定：以A4-pBI121-FGF2工程菌诱导转化得到的转基因人参发根系为材料，利用分子生物生物学的方法检测FGF2基因整合到人参发根基因组中；提取人参发根蛋白，利用SDS-PAGE和Westernblot证明外源基因FGF-2在人参发根内已经得到表达。4.转基因人参发根总皂苷和部分单体皂苷的含量测定：测定结果表明，随着培养天数的增加，转基因发根中总皂苷含量与时间成正比例增长，在一个月后总皂苷的含量基本保持不变，30天时转基因人参发根总皂苷含量(22.51)高于空白对照人参发根总皂苷含量(20.47)；利用高效液相法测得转基因人参发根中三种单体皂苷含量高于对照发根的三种单体皂苷含量。5.转基因人参发根多糖含量检测：测定结果表明，培养30天时转基因人参发根粗多糖含量(11.5)高于空白对照人参发根粗多糖含量(9.5)，差异性显著（P﹤0.05）。
【作者】孟洋；
【导师】赵寿经；
【作者基本信息】吉林大学，发酵工程，2014，硕士
【关键词】人参发根；FGF-2基因；遗传转化；异源表达；生物反应器；

【参考文献】
[1]杨元璋.考虑滑移的轻钢桁架梁-OSB板组合楼盖性能研究[D].重庆大学,结构工程,2014,硕士.
[2]赵瑞龙.建筑用竹篾层积材力学性能的影响因子研究[D].北京林业大学,木材科学与技术,2013,硕士.
[3]吴江涛,魏宇杰.晶界两个自由度对多晶石墨烯力学性能的影响[A].中国力学学会、西安交通大学.中国力学大会——2013论文摘要集[C].中国力学学会、西安交通大学:,2013:1.
[4]陈江峰.国际奥委会的法律性质及运作规则初探[D].外交学院,国际法,2004,硕士.
[5]顾星.太阳能电池活性层和缓冲层材料及性能的研究[D].苏州大学,2014.
[6]汤静安胡满朝.武进：重点打造石墨烯、半导体照明等新兴产业[N].科技日报,2015-01-26006.
[7]张娴静.张艺谋“印象系列”的修辞学分析[D].福建师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[8]蔡虹.艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的活性研究[D].北京中医药大学,针灸推拿学,2013,硕士.
[9]张君一.F公司技术研发部门绩效考核体系优化设计[D].云南财经大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[10]闻万春.省属师范大学发展方式转变的动因与路径研究[D].沈阳师范大学,高等教育学,2014,硕士.
[11]胡亮.基于四旋翼飞行器X450的嵌入式飞控系统研究[D].南京航空航天大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[12]金晶.北京体育大学体育教育专业本科生就业意愿影响因素的调查研究[D].北京体育大学,社会体育学,2013,硕士.
[13]孔祥伟.微流量地面自动控制系统关键技术研究[D].西南石油大学,油气井工程,2014,博士.
[14]宋世英.锯齿形石墨烯电子结构性质的研究[D].浙江师范大学,2012.
[15]吴心瑶.股东派生诉讼之当事人制度研究[D].扬州大学,法律,2012,硕士.
[16]张满英.慢性乙型肝炎湿热中阻证证候漂变及其对证候疗效评价结果的影响[D].福建中医药大学,中西医结合临床（专业学位）,2013,硕士.
[17]顾颖媛.稀疏表示在基于视频的人体动作识别中的应用研究[D].清华大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[18]王艳红.系统安全分析方法在煤矿走向长壁采煤法中的应用[D].中国地质大学（北京）,安全工程,2014,硕士.
[19]张勇,史忠科,戴冠中,周自全.离散系统的鲁棒最小方差滤波新算法及分析[J].自动化学报,2000,06:782-787.
[20]宋洪松,杨程,刘大博.石墨烯/环氧树脂复合材料的介电性能研究[J].功能材料,2012,09:1185-1188.
[21]高晓博.新疆汉—维、维—汉双语人语言使用规律及语言态度比较研究[D].新疆师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[22]蒋忠进,邱小军,林君,陈祖斌.小波变换回波提取在可控震源地震信号处理中的应用[J].石油地球物理勘探,2006,06:687-691+612+725.
[23]董琦飞.加速工况车内声品质的评价研究[D].湖北工业大学,机械制造及自动化,2014,硕士.
[24]何学红.携带诺帝的PVA颗粒治疗兔VX2肝移植肿瘤的实验研究[D].川北医学院,影像医学与核医学,2013,硕士.
[25]李晓,宋广平,孙跃,吴化平,张林.电子束物理气相沉积制备Ni-19.3Cr-20Fe-0.8Al高温合金箔的恒温氧化行为[J].机械工程材料,2014,10:42-45+49.
[26]吕冰.书法元素在空间界面设计中的应用研究[D].山东建筑大学,设计艺术学,2013,硕士.
[27]陈青.有色冶金企业原料供应管理系统设计及软件实现[D].中南大学,计算机技术,2004,硕士.
[28]王婷婷.磺酰肼参与的砜基化和硫醚化反应[D].中国科学技术大学,有机化学,2014,硕士.
[29]陶方.医院市场营销管理理念和现状的研究[D].吉林大学,行政管理,2004,硕士.
[30]张妍.论加缪的中道平衡思想[D].辽宁大学,文艺学,2012,硕士.
[31]张玲仙.盐城市公共部门绩效管理的实践及完善[D].苏州大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[32]谢黎明,凌曦,方源,张锦,刘忠范.石墨烯作为共振拉曼光谱测量中的荧光抑制基底[A].中国物理学会光散射专业委员会.第十五届全国光散射学术会议论文摘要集[C].中国物理学会光散射专业委员会:,2009:1.
[33]高歌农.松籽商务网站开发[D].吉林大学,软件工程,2012,硕士.
[34]龙冰莹.多生理参数远程监护系统数据终端的研究与应用[D].南京邮电大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[35]杨勋烈,王颖.SINCO陶瓷的研究[J].钢铁研究学报.1992(04)
[36]刘明.武汉市入境旅游客源市场预测研究[D].湖北大学,人文地理学,2011,硕士.
[37]邓小炼.基于变化矢量分析的土地利用变化检测方法研究[D].中国科学院研究生院（遥感应用研究所）,2006.
[38]高立克,丁涛,俞小勇,李克文,吕艳萍,张承学.小电流接地系统行波法选线的RTDS测试可行性分析[J].电力系统自动化,2012,17:113-118.
[39]陈鹏.石墨烯负载锡基材料及钼基材料的制备和储锂性能研究[D].上海大学,化学工艺,2013,硕士.
[40]李鹏程.一种抽油机无线示功仪的设计与实现[D].新疆大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[41]彭璐.利奥塔后现代社会学的道德观及其启示[D].曲阜师范大学,教育学原理,2013,硕士.
[42]朱全胜,刘娆,李卫东.EMS人机界面输入端设计准则[J].电力系统自动化,2008,14:45-49.
[43]惠海滨.灌水量和灌水时期对超高产小麦产量和品质的影响[D].青岛农业大学,作物栽培学与耕作学,2012,硕士.
[44]刘毅,赵军.一类不确定离散切换模糊时滞系统的鲁棒非脆弱控制[J].控制与决策,2009,07:1070-1073.
[45]范龙坤.miR-26a对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响及对骨质疏松的作用机制[D].辽宁医学院,口腔临床医学,2012,硕士.
[46]赵秀珍.《醒世姻缘传》程度表达法研究[D].山东大学,汉语言文字学,2013,硕士.
[47]何坤.论我国食品安全的刑法保护[D].北京交通大学,2013.
[48]周舰.宏观调控下成都市中小房地产企业的战略联盟分析[D].电子科技大学,2005.
[49]杨光.基于RFID的农产品运输系统构建及可行性分析[D].大连海事大学,交通运输工程,2014,硕士.
[50]罗莎.基于3PM理念的农业企业薪酬体系研究[D].东北农业大学,农业经济管理,2013,硕士.