水体中蒽酶联免疫检测方法研究

【摘要】多环芳烃（PAHs）是现今自然界中最早被发现的致癌物质，分布于大气、水体、土壤中，是一类普遍存在于环境中的化合物，其潜在的不利影响已被广泛地报道[1]。色谱法是定量分析多环芳烃最常用的方法之一。例如：气相色谱法（GC）、气相色谱－质谱联用法（GC-MS）、液相色谱（LC）和液谱－质谱联用法（LC-MS）。在过去10年中，已建立了多种免疫分析法用于多环芳烃的检测。目前，国外市场上已有几种基于各种多环芳烃类物质的免疫试剂盒在销售。然而，到目前为止，很少见到检测蒽的ELISA方法被报道。建立多环芳烃的免疫学分析方法，对完善我国多环芳烃检测技术具有一定的参考价值。本文选择美国环保署规定的16种优先级多环芳烃之一蒽作为研究对象。用蒽丙酸通过活化酯法分别与两种载体蛋白，牛血清白蛋白（BSA）及卵清白蛋白（OVA）偶联，成功制备了人工抗原。以ANT-BSA偶联物为免疫原制备多克隆抗体，血清效价达到2.56×105，用ProteinGHP亲和层析柱将之纯化。用纯化后的血清建立并优化了间接竞争酶联免疫吸附分析法（ic-ELISA）。检测蒽的线性回归方程是y=-0.179x+0.9166，相关系数R2等于0.9947，线性检测范围是从0.6ng/mL到36.5g/mL。该方法测定蒽的IC50为212ng/mL，最低检出限为0.68ng/mL。研究了16种多环芳烃与该抗血清的交叉反应，除了与荧蒽、芘的交叉反应率为2.43%和1.84%外，与其余那些结构相似的多环芳烃的交叉反应率均不超过1%。模拟样本检测结果，回收率在95.75%～109.60%之间。对实际样品的测试结果如下:湖水1.44ng/mL，河水1.63ng/mL，污水2.38ng/mL。
【作者】李丹；
【导师】周玉；
【作者基本信息】吉林大学，兽医，2014，硕士
【关键词】蒽；多环芳烃；多克隆抗体；间接竞争ELISA；

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