血管内皮生长因子家族及其受体在猪孤雌胚胎中表达的相关研究

【摘要】近来，猪已经被作为研究人类疾病和干细胞治疗等的一种重要的动物模型。而猪孤雌胚胎由于有着无需受精且不违背伦理道德的优势，受到了人们的广泛关注。但是通过研究，人们发现猪的孤雌胚胎由于胎盘的缺陷而无法发育到期。目前，人们认为猪的孤雌胎儿之所以存在发育异常，一部分是由于缺少母源印记基因所导致的，而这些印记基因的表达异常则与它们的启动子甲基化水平有着关联。有报道还指出孤雌胎盘还存在着明显的血管发育缺陷，因此我们推测，孤雌胎盘的血管发育缺陷可能也是导致孤雌胎儿的发育不到期的重要因素。本实验首先通过孤雌激活技术获得了3组猪孤雌胚胎，数量分别为217，238和190个，然后通过胚胎移植将它们分别植入到3头发情的10月龄大白母猪（P-1,P-2和P-3）体内；同时，利用人工授精方法，对同期发情的3头10月龄大白猪（N-1，N-2和N-3）进行授精。在怀孕第28天（D28），通过B超发现母猪均已怀孕。然后在当天便将母猪分别麻醉，取出母猪的子宫并分离出子宫内的胎儿和胎盘。其中，母猪P-1,P-2和P-3分别的产仔数为6，8和11；母猪N-1，N-2和N-3中的胚胎数目分别为15，13和16。通过数据对比，发现母猪所怀的孤雌胎儿的数量要低于正常胎儿数量，这说明了猪孤雌胎儿的出生率可能是低于正常胎儿的。另外，通过对采集到的胎儿胎盘进行形态学对比，发现，猪孤雌胎儿和胎盘的尺寸要明显小于正常对照组，而且孤雌胎盘的颜色明显比对照组浅，结合前人的研究，我们的结果同样验证了孤雌胎盘的血管发育是有明显缺陷的。基于形态学上血管发育的不足，我们假设影响血管发育的重要因子血管内皮生长因子（VEGF）家族的表达可能与猪孤雌胎盘的发育缺陷有关联。因此，利用Q-PCR对猪孤雌胎儿胎盘中四个VEGF家族及其受体（VEGFA，PLGF，KDR和FLT-1）的表达模式做了检测，结果发现在孤雌胎儿中，这四个因子的表达均无明显变化（p>0.05）；而在孤雌胎盘中，除了VEGFA的表达无显著变化之外（p>0.05），KDR，FLT-1和PLGF都呈现明显的低表达（p<0.05）。这说明VEGF家族可能在孤雌胎盘发育过程中起到关键作用，进而影响孤雌胎儿的后期发育。报道证实，VEGFA的亚型通过与其受体结合，进而以不同方式激活VEGF信号通路，从而完成其对血管生成的作用。据此，我们首先利用Q-PCR对孤雌胎儿胎盘中VEGF在猪中的三个亚型VEGF120，VEGF164和VEGF188的表达做了分析，结果表明，在孤雌胎儿中，三个亚型的表达无明显变化（p>0.05）；而在孤雌胎盘中，VEGF164和VEGF188呈低表达，而VEGF120的表达出现了异常升高（p<0.05）。同时，利用RT-PCR对孤雌胎儿胎盘中VEGF亚型的表达进行了验证，发现与Q-PCR的结果完全相符。所以我们推测，VEGF家族及其受体在孤雌胎盘中的低表达，尤其是VEGF亚型的表达紊乱，可能影响了猪孤雌胎盘的血管生成过程，造成了孤雌胎盘发育的缺陷，进而导致了孤雌胚胎的早期发育阻滞。
【作者】韩杨；
【导师】欧阳红生；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】孤雌发育；孤雌激活；血管发生；VEGF；VEGF亚型；胎盘；

【参考文献】
[1]王华生.数字网络环境下学术期刊创新发展研究[J].河南大学学报(社会科学版),2014,05:144-156.
[2]罗茹.宫颈高级别腺上皮内瘤变80例的临床病理及免疫组化研究[D].浙江大学,妇产科学,2013,硕士.
[3]陈雪燕.肌特异性miRNA在肌细胞分化中的作用及对肌营养不良的影响[D].福建医科大学,病理学与病理生理学,2014,硕士.
[4]夏良武.销—盘摩擦过程中的热行为研究[D].华东理工大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[5]杨萍.凤翔泥塑当代变迁研究[D].中国艺术研究院,美术学,2004,硕士.
[6]贾海朝.浆纱机卷绕机构张力控制系统研究[D].天津大学,控制理论与控制工程,2004,硕士.
[7]王永红,周正南,张书法.利用地震和测井资料估算孔隙度[J].石油地球物理勘探,1990,05:572-577+646.
[8]黄炳辉.政府良性媒介形象构建研究[D].西南政法大学,新闻学,2012,硕士.
[9]王凯,项斌,施佳琪.对甲苯亚磺酸合成工艺的改进[J].浙江化工,2013,06:34-36.
[10]任义庆,徐仲达,马在田.应用模拟退火法反演横波速度[J].石油地球物理勘探,1996,05:677-684+750.
[11]程彤.跨行银行卡交易清算系统分析与设计[D].云南大学,软件工程,2012,硕士.
[12]王永生.中国出口退税政策研究[D].华东师范大学,国际贸易学,2002,硕士.
[13]张艳.洞庭湖区钉螺与血吸虫病时空变化特征及其与环境因子关系研究[D].湖南大学,环境工程,2014,硕士.
[14]高为炳.用谐波平衡法研究具有几个非线性元件的单廻路调节系统[J].自动化学报,1964,03:136-145.
[15]胡虹宇.政治联系、市场化进程与高管变更的研究[D].苏州大学,会计学,2014,硕士.
[16]杨莎,齐暑华,程博,张梦玉.导电胶的研究进展[J].粘接,2014,08:66-70.
[17]杨海军,梁德群,田原.基于方向场特征的指纹图像奇异点检测[J].自动化学报,2001,02:272-275.
[18]任维聪.右背外侧前额叶在时间知觉中的作用[D].河北师范大学,基础心理学,2013,硕士.
[19]张宇.关于日语教育中日本文化导入的考察与教育指导[D].渤海大学,课程与教学论,2014,硕士.
[20]张立群.红色影视剧中的革命叙事研究[D].山西师范大学,文艺学,2013,硕士.
[21]冯文婷,邹晓明,沙丽清,陈建会,冯志立,李检舟.哀牢山中山湿性常绿阔叶林土壤呼吸季节和昼夜变化特征及影响因子比较[J].植物生态学报,2008,01:31-39.
[22]金志成,周象贤.受众卷入及其对广告传播效果的影响[J].心理科学进展,2007,01:154-162.
[23]余梦.变速恒频风力发电系统最大风能捕获控制研究[D].湖北工业大学,控制工程（专业学位）,2013,硕士.
[24]俞晓丽.双馈并网风力发电机预测直接功率控制的研究[D].燕山大学,电力电子与电力传动,2014,硕士.
[25]伍宇坤.城市道路平交口空间的整合设计研究[D].北京交通大学,建筑与土木工程（专业学位）,2013,硕士.
[26]汤辰.基于球阵列测量的近场波束形成技术研究[D].合肥工业大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[27]李洪革,林心玉.长岭断陷深层构造特征及天然气勘探潜力分析[J].石油地球物理勘探,2006,S1:33-36+142+144-145.
[28]马贤娜.WARINGIN初中学校一年级教材分析研究[D].河北师范大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[29]柏桦.基于品牌资产的老字号顾客忠诚度的研究[D].华东理工大学,企业管理,2014,硕士.
[30]王良勇,柴天佑,方正.考虑驱动系统动态的机械手神经网络控制及应用[J].自动化学报,2009,05:622-626.
[31]张维然,李英姿,王曦,王伟,钱建强.原子力显微镜高次谐波幅度对样品弹性性质表征的研究[J].物理学报,2013,14:117-123.
[32]杨静.金融功能区建设与财政支出政策研究[D].山西财经大学,财政学,2013,硕士.
[33]方亮.决策树算法在高校毕业生就业分析中的应用研究[D].湖南大学,软件工程,2013,硕士.
[34]邹谋勇.Bacillus subtilis碱性果胶酶的生产及基因工程菌株的构建[D].山东大学,微生物学,2013,硕士.
[35]王若冰.上海中外资饭店竞争力比较研究[D].华东师范大学,旅游管理,2004,硕士.
[36]冯燕.流媒体技术在远程教学中的应用研究[D].湖南大学,计算机科学与技术,2010,硕士.
[37]肖冬平,王小菲.企业文化测量研究述评[J].红河学院学报,2014,05:71-75.
[38]杜莹.免疫阴性选择算法检测器研究及其在蠕虫检测中的应用[D].湖南大学,计算机技术,2011,硕士.
[39]罗传武.状态监测与故障诊断系统在大型化工机组上的应用[D].大连理工大学,控制工程（专业学位）,2013,硕士.
[40]王贵琴.事业单位全面预算管理控制的优化研究[D].首都经济贸易大学,会计学,2013,硕士.
[41]洪永磊.中国星级饭店空间分布演变及影响因素研究[D].华中师范大学,自然地理学,2014,硕士.
[42]徐永康.汽车气动升力的试验与仿真研究[D].湖南大学,车辆工程,2014,硕士.
[43]师建峰.宁晋县中小学汉字书写教育推广研究[D].河北师范大学,美术学,2012,硕士.
[44]谢小飞.社会转型期中国共产党执政风险问题研究[D].山东大学,中共党史,2013,硕士.
[45]张克青.立体显示设备在航海模拟器中的应用研究[D].大连海事大学,交通信息工程及控制,2013,硕士.
[46]李景虹.石墨烯及石墨烯类似物的生物分析与生物传感[A].中国化学会.中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C].中国化学会:,2012:1.
[47]郗磊.土地供给调整优化产业结构机制研究[D].首都经济贸易大学,区域经济学,2013,硕士.
[48]张瑞,张早娣,王泽松,王世旭,付德君.低能团簇负离子束研究[J].武汉大学学报(理学版),2014,01:87-90.
[49]庹莹瑛.基于压缩感知的稀疏信道估计算法研究[D].湖南大学,信息与通信工程,2011,硕士.
[50]张小丽.纵弯及纵径振动模式转换功率超声换能器的研究[D].陕西师范大学,声学,2014,博士.